方忠意，刘素梅，刘占通，邱天宝，韩 立，王军红

（河南省兽药饲料监察所，河南 郑州 450008）

穿梅三黄散收载于《中国兽药典》2020年版二部中，是由大黄、黄芩、黄柏、穿心莲、乌梅五味药材经粉碎、过筛和混匀制备而成的中兽药散剂，主要用于治疗水产动物细菌性败血症、肠炎、烂鳃与赤皮病［1-2］。黄芩苷属黄酮类化合物，对多种病毒、真菌、细菌具有抑制作用［3-5］，常用其含量作为评价黄芩及其制剂质量的一种手段。目前，《中国兽药典》中穿梅三黄散的质量标准只有显微和薄层鉴别检验，缺少含量测定的方法和指标。该研究参考了部分文献［6-7］，建立了黄芩苷含量测定的高效液相色谱法，可以更加精准地评价穿梅三黄散质量，为兽药生产企业加强产品质量控制提供了参考手段。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

1.1.1 仪器设备

Waters高效液相色谱系统：包含2695分析系统、2487紫外检测器、Empower2色谱工作站；MILIPORE超纯水处理器；METTLERXP205电子天平。

1.1.2 试药试剂

黄芩苷对照品来自中国兽医药品监察所，批号为Z01271705，含量以96.8%计；穿梅三黄散样品为实验室自制（大黄25g、黄芩15g、黄柏5g、穿心莲2.5g、乌梅2.5g，粉碎，过筛，混匀即得）；穿梅三黄散阴性对照样品为实验室自制（大黄25g、黄柏15g、穿心莲2.5g、乌梅2.5g，粉碎，过筛，混匀即得）；乙腈、甲醇为色谱纯试剂，试验中使用的水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

1.2 方法与结果

1.2.1 色谱条件的选择

参考相关有关文献，通过比较不同色谱洗脱条件，以样品中黄芩苷色谱峰的峰形是否对称、有无杂质干扰为原则，确定色谱条件为：XBridgeC18（5μm，4.6mm×150mm）色谱柱，柱温为30℃，流动相为乙腈-0.2%磷酸（22∶78），检测波长为278nm，进样量为10μl。……