傅婧 佘娟 董睿

目的：建立口含烟中肠道沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的双重荧光PCR检测法。方法：在NCBI中检索肠道沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的毒素基因序列，设计引物和探针;对收集到的肠道沙门氏菌、金黄色葡萄球菌各10株菌株进行实验检测，检查方法特异性;制作阳性质粒稀释梯度，探索方法检出限;调取30批次实际样品，验证方法实用性。结果：建立的双重荧光PCR法可准确检测肠道沙门氏菌sseL基因、金黄色葡萄球菌Coa基因，檢出限低至10 copies/μL;在实际样品的方法比对中与标准培养法结果相同。结论：双重荧光PCR法可有效缩短口含烟中肠道沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的检测时间并减少实验操作，具有一定实用价值。

口用型无烟气烟草制品通俗称为口含烟，主要分类有胶基烟、袋装口含烟、含化烟等，在欧美国家占有一定市场份额，近年来在我国的市场占有率也快速增长。在产品分类上，口含烟属于食品，安全指标包括感官、物理、化学、微生物等多项检测。其中，微生物指标包括菌落总数、大肠菌群、霉菌、致病菌检测。

Sa. enterica、St. aureus的基因检测研究较为深入，通常选择16S rRNA序列或毒素基因作为靶标。16S rRNA是目前最常用的细菌系统分类分子钟，但一些报道称在致病菌检测上存在一定误检率;另一方面，随着对致病菌毒性机理的深入研究，已有若干毒素基因可供筛选检测，特异性更强。本研究设计了毒素基因的引物和探针，在收集到的Sa. enterica、St. aureus菌株上进行验证，从而建立口含烟中Sa. enterica、St. aureus双重实时荧光PCR检测法。……