1986年 鸡冠提取

公鸡冠透明质酸的制备及其理化性质 沈渤红 张天民

摘要：选用我国尚未开发的动物资源公鸡冠为原料，设计了适于生产的制备工艺，并对所得产品进行了理化分析，为透明质酸制剂的生产提供了实验依据。

结论：为了保持透明质酸的大分子特性，采用了一次蛋白酶解、Sevag技术与CPC分级沉淀技术配合使用，有效地除去了蛋白质和核酸。实验中发现：在高盐浓度下，大部分蛋白质遇到有机溶剂可变性，或被盐析沉出，或在乙醇沉淀之后不再溶于水，这一步可明显地使提取液得到纯化。根据多糖与蛋白质的CPC复合物解离临界盐浓度不同的这一原理，我们进一步采用CPC分级沉淀，以除去剩余蛋白质与核酸。

实验中观察到，乙醇沉淀透明质酸水提液时，出现两种形式的沉淀，主要部分为纤维状，漂浮于上部，另一部分为粉末状，沉于下部。当在强酸条件下，用氯仿处理提取液后，再沉淀时，纤维状沉淀消失，溶液黏度明显降低，说明纤维状沉淀与大分子特性和溶液浓度有关。透明质酸溶液浓度在低于0.05%时，其分子在溶液中大多独立存在;当浓度大于0.1%时，部分交织成网状结构。推测这种网状结构物质沉淀下来呈现纤维状，而部分散的分子沉淀下来呈粉末状。

从保持其高分子量、高黏度和高纯度等方面进行了理化分析，结果表明：经换算，本工艺制备的鸡冠透明质酸的分子量接近Healon（眼用黏弹剂），并具有高黏度及高纯度特性，可用于配制透明质酸制剂。

文献来源：沈渤红，张天民.公鸡冠透明质酸的制备及其理化性质[J].医药工业，1986，17（7）：291-294.

1986年 动物眼玻璃体提取

牛眼玻璃体透明质酸的研制及应用 凌沛学 张天民 张子刚

摘要：从牛眼玻璃体制备了透明质酸，所得样品的理化分析结果表明其质量达到眼科用的要求，动物实验及眼科临床试用后认为其制剂可用于眼科临床。

结论：由于眼科用HA制剂要求具有高黏度，本工艺尽量采用温和条件，避免可能使HA降解的处理，并且使杂质含量低于国外产品。用乙醇沉淀HA时，可得到絮状和粉状两种沉淀，将粉状HA用水溶解，再用丙酮沉淀，可变成絮状，说明两者在结构及分子量上并无显著差异。制剂制备工艺中选用26%甘油等渗液作溶剂，既可增加制剂黏度，又可提高其稳定性。

动物眼科实验各项观察结果表明，HA所致眼组织反应均略低于对照组，证明所得制剂无抗原性及致炎性，眼组织可很好地耐受。眼科临床试验表明，牛眼HA制剂可加深前房，维持前房一定深度，便于手术操作，保护角膜内皮细胞，防止虹、角膜黏连，提高手术成功率。

文献来源：凌沛学，张天民，张子刚.牛眼玻璃体透明质酸的研制及应用[J].医药工业，1987：18（7）：295-299

2005年 人脐带提取

从人脐带残留物中分离、纯化和表征透明质酸

Guillermo Lagoa， Loida Orunab， Jose A.Crematac， Carlos Perezd，Gabriel Cotoa， Efren Lauzana，John F.Kennedye

摘要：本文的主要目的是讨论分离透明质酸的新程序。透明质酸可以从人脐带残留中获得，从其他生物制药生产中获得。该路线涉及用氯化钠溶液处理人脐带残留物，然后用季铵盐溶液沉淀;将固体重新悬浮在氯化钙溶液中以解离透明质酸季铵盐复合物，然后乙醇诱导沉淀得到产物。产物经氯仿抽提4次纯化，并用化学方法如Blumenkrantz和Asboe-Hansen糖醛酸测定法、Elson Morgan己糖胺定性試验、特性黏度、离子交换色谱法、13C核磁共振谱等表征。结果表明，该产品可用于配制治疗皮肤病的软膏、乳液和乳膏。

结论：本文描述了一种从用有机溶剂处理过的人脐带产生的副产品中分离HA钠盐的来源，迄今为止从未报道过。与其他已知方法相比，所采用的程序更简单，并具有多个优点。例如，开发Balazs方法（1979）需要许多步骤。在Balazs方法的第一阶段，原材料用水洗涤，直到从组织中去除血液，然后压碎并储存。在第二阶段，组织用20倍体积的水和1倍体积的氯仿处理，搅拌24小时并过滤以提取HA和其他多糖。在我们的方法中，不需要第一个Balazs阶段，因为使用了其他生产中剩余的原材料，并且使用0.2%w/v氯化钠水溶液作为HA提取的主要溶剂。这种浓度的氯化钠溶液在萃取极性化合物（包括HA）时更有效。

这种方法也可以与Danishevsky和Bella（1966）的方法进行比较，因为同样使用0.2%氯化钠溶液作为从原料中提取HA的溶剂，但在我们的案例中，人类脐带残留物被用作生物来源和0.9 M氯化钙溶液，仅用于解离HA-CTAB复合物。这些方面以前没有报道过。

文献来源：Guillermo Lago，Loida Oruna，Jose A.Cremata，Carlos Perez，Gabriel Coto，Efren Lauzan，John F.Kennedy.Isolation，purification and characterization of hyaluronan fromhuman umbilical cord residues[J].Carbohydrate Polymers，2005.62：321-326.

2006年发酵法生产

发酵法生产透明质酸 张玉 张朝中

摘要：透明质酸（hyaluronic acid，HA），又名玻璃酸，是一种酸性黏多糖。1934年美国Meyer等首先从牛眼玻璃体中分离出该物质。此后，人们利用现代发酵技术和设备，以提高HA产率为目的，对发酵生产HA进行了较全面地研究。

HA发酵的一般工艺流程：[培养]→[移种]→[醇沉]→[溶解]→[络合沉淀]→[醇沉]→[脱水干燥]

结论：发酵法生产的HA在菌体外的溶液中游离存在，与从动物组织提取相比，无需提取步骤，易于分离纯化。HA的发酵水平从2～4g/L，提高到6～7g/L，发酵法生产HA比提取法有较大优势。

目前所用的菌种是经过诱变处理链球菌，其的营养物质目前所用的氮源为各种肉浸膏、蛋白胨、氨基酸、酵母膏等，其中酵母膏最常用。在发酵液中添加一定量的谷氨酸和精氨酸，可以提高HA的产率。碳源主要是各种单糖、蔗糖和淀粉水解物，最常用的是葡萄糖。其它还有磷酸盐、硫酸盐，钾、钠等无机盐，铁、锰等微量元素。

HA的发酵有需氧发酵也有厌氧发酵。目前看来，多倾向于有氧发酵，专利文献中HA产率较高的多采用通气需氧发酵，而且分子量高。厌氧发酵产率低，分子量也低。在整个发酵过程中通常保持一个适当的溶氧量，而在不同的阶段采用不同的溶氧量，也是提高HA产率的手段之一。

在HA的发酵生产中，pH值是一个重要的因素，一股控制在6.0～8.5范围内，低于6.0或高于8.5，会影响菌体的生长，降低HA的产率和分子量。在发酵过程中，需要用氢氧化钠或碳酸钠溶液进行中和，以维持适当的DH值。

发酵生产HA具有产量不受原料资源限制、成本低、分离纯化工艺简捷、易于规模化生产等特点，是HA生产的发展方向，应进一步深入研究和提高。

文献来源：张玉，张朝中发酵法生产透明质酸[J].北方药学，2006，3（02）：10-11.