陈慧芳，黄绮亮, 胡智超, 潘晓婷, 吴志胜, 白银山

外泌体microRNA在猪成熟和闭锁卵泡中的表达差异及功能分析

陈慧芳，黄绮亮, 胡智超, 潘晓婷, 吴志胜, 白银山

佛山科学技术学院生命科学与工程学院，广东佛山528231

【】通过分析成熟卵泡液外泌体（mature follicular fiuid Exosomes, mffEXs）和闭锁卵泡液外泌体（atretic follicular fiuid Exosomes, affEXs）miRNA的表达差异，探索卵泡液外泌体（EXs）miRNA在卵泡发育和闭锁过程中的调控作用。本研究通过抽提4—6 mm猪成熟发育和闭锁卵泡的卵泡液分离外泌体，进行粒径分析及Western Blot检测对EXs进行鉴定，接下来对特征性EXs携带的miRNA测序和功能富集分析，筛选关键信号通路和差异基因。最后，将mffEXs和affEXs作为添加剂进行颗粒细胞培养，利用Q-PCR检测技术分析关键基因的表达，验证两类卵泡液内EXs miRNA在卵泡发育中的调控功能。成功分离了mffEXs和affEXs，对比mffEXs测序结果，affEXs中有90个miRNA上调表达，220个miRNA下调表达，表明了卵泡液中的miRNA表达水平与调控卵泡发育有关；KEGG富集分析结果显示两类卵泡的差异信号通路主要集中在Ras、cAMP、P53和MAPK等信号通路，涉及调控卵母细胞发育、减数分裂以及颗粒细胞细胞周期等生物学功能。在闭锁卵泡中，上调表达的ssc-let-7a和ssc-miR-133a-3p分别潜在靶向调控细胞周期蛋白依赖性激酶（）和胰岛素生长因子（），抑制了G1和G2/M期的运转和类固醇激素代谢，促使颗粒细胞周期运转受阻和颗粒细胞凋亡，引起卵泡闭锁的发生；下调的ssc-miR-21-5p潜在靶向肿瘤抑癌基因（），抑制细胞周期运转，促使颗粒细胞凋亡。在体外培养的颗粒细胞中分别添加mffEXs和affEXs，Q-PCR结果显示在mffEXs中显著上调表达，而显著下调表达，表明了测序分析结果的可靠性。……