蔡云龙 刘宇希 陈晓 孙晓雨 卢方晋

肾细胞癌下调蛋白 1(Down-regulated in renal cell carcinoma 1，DRR1)是一种新的肌动蛋白的结合蛋白，可以促进丝状肌动蛋白(F-actin)的形成［1，2］。同时，DRR1 在肿瘤以及在神经系统中的生物学作用已被广泛报道［3-7］，然而关于DRR1 的相关作用机制仍尚不明确。DRR1 的氨基酸序列中存在卷曲螺旋结构域 (coiled-coil domain)，表明其可以与其他蛋白质相互结合［8］。前期研究结果发现DRR1 可以与F-actin 结合并促进F-actin 的形成［6］，F-actin 是一种高度保守的蛋白，参与机体多种生物学活动［9，10］。最近，通过GST pull down 实验筛选与DRR1 相互作用的蛋白质，质谱分析结果确定TMOD2 是与DRR1 相互结合的蛋白之一［11］。结果显示，TMOD2 与DRR1 在原代培养海马神经元细胞中相结合，并且共同参与调节神经细胞轴突的形成［11］。TMOD 是一个肌动蛋白结合蛋白家族，包括四个成员(TMOD1，TMOD2，TMOD3 和TMOD4)［12］，其中TMOD1 和TMOD3 在各种组织中高表达，而TMOD2 和TMOD4 分别在神经系统和骨骼肌中表达，TMOD2 现已被证明能调节神经元的神经突延伸和突触密度［13］。另外，有研究证明，TMOD 蛋白家族可以通过与F-actin 结合从而调节肌动蛋白动力学［14］。本研究中，利用免疫共沉降技术深入分析不同长度的DRR1片段与TMOD2 之间在细胞内的相互作用。结果发现，不同长度的DRR1 片段与TMOD2 的结合能力存在差异。本研究成果为揭示DRR1 与TMOD2 之间的相互作用，以及两者结合后的生物学功能提供了新的线索。

1 材料与方法

1.1 材料 兔抗Venus 抗体(日本MBL 公司)和小鼠抗血凝素抗体(抗HA、美国sigma-aldrich 公司)，蛋白G 琼脂糖凝胶(protein G sepharose，美国GE Healthcare公司)，胎牛血清(美国Gibco 公司)。不同长度的DRR1 表达载体与TMOD2-HA 表达载体的构建方法按照前期研究进行［6，10］。……