蒋思文，房立春，冯泽新，焦 鹏，王玥超，梁 艳，史东宇，陈 青*

(1.北京农学院 生物与资源环境学院/ 农业农村部华北都市农业重点实验室，北京102206；2.山东省农业科学院，济南250100)

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)是属于非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfarviridae)的大型包膜病毒，也是唯一已知的虫媒DNA病毒，主要在胞质中完成复制和组装[1,2]。ASFV病毒粒子具有双层囊膜结构，呈二十面体形态，平均直径200 nm，不同分离株的双链DNA长度范围在170 ～ 193 kbp之间[3, 4]，编码150～200种蛋白质，其中包括负责调节病毒和宿主细胞功能的相关蛋白[5, 6]。

ASFV的I215L基因编码一个与泛素结合酶(ubiquitin conjugating enzyme, UBC，E2)高度同源的基因序列，且在大肠杆菌中表达时具有UBC活性。它在纯化的泛素激活酶(E1)和ATP存在下与泛素分子形成硫醚键，随后将泛素转移到特定的蛋白质底物上[7]。这是迄今为止报道的唯一一个由病毒基因编码的具有功能活性UBC酶，故将ASFV的I215L基因产物称为泛素结合酶(UBCv1)[7-9]。重组UBCv1在体外可以自泛素化，也可以泛素化组蛋白以及ASFV病毒粒子核壳多蛋白pp62[10]。最新研究发现了病毒UBCv1与宿主发生互作的蛋白，Barrado推测UBCv1通过影响mTORC信号通路、调节宿主翻译机制及ASFV生命周期中细胞蛋白的表达发挥作用，但具体机制仍不清楚[9]。本文作者将ASFV的I215L基因克隆至原核表达载体中构建UBCv1重组质粒，低温诱导表达、亲和标签纯化该蛋白，并在此基础上制备多克隆抗体，为非洲猪瘟病毒UBCv1蛋白生物学功能的深入研究提供材料，并为ASFV致病机理研究提供支持。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂

pET-28a载体、p3XFLAG-CMV-7.1-I215L载体由北京畜牧兽医研究所兽医公共卫生创新与管理团队提供；……