刘玲 杨亚珍 俞东容*

慢性肾脏病（CKD）已成为威胁数十亿人的全球性健康问题。据报道，中国CKD 的发病率达10.8%［1］。CKD 常导致肾脏纤维化，病因包括成纤维细胞聚集、间质小管的上皮-间充质转变（EMT）、小管细胞丢失以及肾小管周围微脉管系统稀疏［2］。EMT 是肾脏纤维化进展中的关键之一［3］，其特征是失去E-cadherin 蛋白和细胞角蛋白等黏附分子，并出现新的间充质标记，如vimentin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA），I 型胶原蛋白和纤连蛋白［4］。Wnt/β-catenin 信号通路是肾脏纤维化过程中关键的信号通路之一。尽管在正常肾脏中该信号通路处于非激活状态，但在多种肾脏损伤中，Wnt/β-catenin 信号被激活［5］。双氢青蒿素（DHA）是从青蒿中提取的青蒿素的半合成衍生物。除了抗疟疾，DHA还被发现具有较多潜在的药理作用，包括抗肿瘤、抗炎和抗纤维化。本研究通过TGFβ-1 体外诱导的HK2 细胞和体内单侧输尿管阻塞（UUO）模型，探讨DHA 的抗纤维化作用。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 用含有10%胎牛血清（FBS），1.2 g/L碳酸氢钠，1%青霉素/链霉素的DMEM/F12 培养基，在37℃和5%CO2中条件下培养人肾近端肾小管上皮细胞系细胞（HK2）。用0.2%胰蛋白酶（Sigma）和0.02%EDTA 将HK2 细胞消化后接种到6 个孔板中。当HK-2细胞生长到80%时，用无血清DMEM/F12 饥饿过夜。饥饿24 h 后，用TGFβ-1（Peprotech）和DHA 处理HK2细胞。将HK2 细胞随机分为6组：正常组（normal组），TGFβ-1组（5 ng/mL），TGFβ-1（5ng/mL）+DHA（10 μM）组，TGFβ-1（5 ng/mL）+DHA（25 μM）组，TGFβ-1（5 ng/mL）+DHA（50 μM）组 和TGFβ-1（5ng/mL）+DHA（100 μM）组。所有细胞培养24 h 后进行后续处理。

1.2 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）肾脏组织和HK2 细胞中的总RNA 分离采用RNA 分离试剂盒（TaKaRa）进行分离。2 μg 总RNA 用于逆转录。采用StepOnePlus实时PCR系统（Applied Biosystems）和SYBR Premix Ex Taq（TaKaRa）检测纤连蛋白、E-cadherin、胶原I、波形蛋白和α-SMA 的mRNA 表达水平。扩增条件采用95℃持续30 s，然后进行40 个循环扩增（95℃持续5 s，60℃持续30 s）。……