谭晓山，周 迪，李 平，李 俊，杨 蓉，陈光候，王 燕，陈大芳，龙清孟

(贵州省种畜禽种质测定中心，贵州 贵阳 550018)

山羊冷冻精液人工授精技术不仅可以减少本交带来的疫病传播风险，还能减少种公羊的饲养数量，减少饲养成本及引种成本，同时提高优秀种公羊的利用率和资源共享率，解决种羊场之间在地域及使用时间上的限制，具有良好的社会经济效益。山羊冷冻精液生产的关键在于稀释液配方及冷冻保护剂。本试验通过比较4种常用的山羊冷冻精液稀释液配方和2种冷冻保护剂对贵州黑山羊精液品质的影响，筛选出适合贵州黑山羊冷冻精液的稀释液和冷冻保护剂。

1 材料与方法

1.1 试验动物选择体况良好、无繁殖疾病的2～4岁贵州黑山羊种公羊3～5只作为试验动物。

1.2 试验时间与地点2018年6月在贵州省册亨县冗渡镇冗坪肉羊育种与繁殖工程中心及规模化健康高效养殖示范基地进行。

1.3 主要试剂TALP稀释液、葡萄糖、果糖、柠檬酸钠、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、青霉素、链霉素、考马斯亮蓝、乙二醇、甘油。

1.4 主要仪器全自动精液质量分析系统(德国Minitube AndroVision)、移液器(Eppendorf L23114F)、正置显微镜(奥林巴斯CX41)、水浴锅(HH.S21-4)、17 ℃恒温箱(FYL-YS-150L)、超声波细管封口机、手提式车载运输箱(FYL-YS-50L)、高压灭菌锅(LMQ.C-100E)。

1.5 山羊冷冻精液稀释液配方根据国内对山羊冷冻精液稀释液配方的研究，选择4种较理想的配方分为4组，各组选择2种不同冷冻保护剂(见表1)。

表1 山羊冻精稀释液配方及分组

1.6 TALP稀释液配方 配制TALP稀释液100 mL：NaCl 654.5 mg，KCl 20 mg，MgCl2·6H2O 10 mg，NaH2PO46.2 mg，NaHCO3210 mg，葡萄糖250 mg，丙酮酸11 mg，乳酸钠112 mg，HEPES 120 mg。高压灭菌，使用前加入BSA 6 mg/mL，卡那霉素 7.5 mg/mL，pH值调至7.6[5]。……