HSF4b基因敲除下调αB-晶状体蛋白表达介导白内障发生

2021-11-04高熠辉牟丽莎崔婷婷徐晶莹徐国彤

同济大学学报(医学版) 2021年5期

高熠辉，牟丽莎，崔婷婷，闫欣，徐晶莹，徐国彤

(1. 同济大学医学院，上海 200092; 2. 深圳大学第一附属医院转化医学研究院，广东深圳 518035)

先天性白内障(congenital cataract, CC)是世界性儿童视力障碍和失明的最常见原因，约四分之一是由遗传缺陷引起的[1]。HSF4(heat shock trans-cription factor 4, HSF4)是热休克转录因子家族的成员[2]。Hsf4基因敲除后，小鼠具有明显的CC表型[3]。

本课题组前期利用Hsf4tm1Xyk基因敲除小鼠对HSF4在白内障发生中的调控作用展开了研究，发现热休克转录因子4b(HSF4b)对波形蛋白(vimentin, VIM)的表达呈现负调控作用[4]。本研究利用Hsf4tm1Xyk基因敲除小鼠模型进一步寻找了HSF4的另一个下游分子αB晶状体蛋白(αB-crystallin, CRYAB)，并分析了HSF4b、CRYAB和VIM相互作用的分子机制，旨在为筛选和研发抗白内障药物确定方向。

1 材料与方法

1.1 实验材料及试剂

人晶状体上皮细胞系SRA01/04、pcDNA3.1-HSF4b质粒由中科院健康所孔祥银研究员惠赠；pGL3-Luc、pRL-TK、pTER+载体由中科院健康所金颖研究员惠赠；胎牛血清购自Gibco公司；DMEM/低糖液体培养基、DAPI、多聚甲醛、Triton-X-100均购自Sigma公司；胰酶、青霉素/链霉素购自上海碧云天有限公司；NE-PER核浆分离试剂盒、Light Shift Chemiluminescent EMSA试剂盒、Biotin 3′ End DNA Labeling试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒、TRIzol total RNA提取试剂、ECL反应试剂盒、LipofectamineTM2000转染试剂、Dynabeads磁珠均购自Thermo公司；Dual-Luciferase报告基因检测试剂盒购自Promega公司；牛血清白蛋白购自生工生物工程(上海)有限公司；2×Taq PCR Mastermix购自天根生化科技(北京)有限公司；荧光封片剂购自丹麦DakoCytomation公司。

实验中所使用抗αB-crystallin抗体(Ab13497)购自Abcam公司；抗Vimentin抗体(26091)购自New-EastBio公司；抗HSF4b抗体(sc-398645)购自Santa-Cruz公司；Anti-rabbit-Cy3二抗(711-165-152)、Anti-mouse-Cy3二抗(715-165-150)、Anti-rabbit-HRP二抗(711-035-152)、Anti-mouse-HRP二抗(715-035-150)、Anti-goat-HRP二抗(705-035-147)均购自Jackson Immunoresearch Laboratories公司；HRP-con-jugated Beta Actin抗体(HRP-60008)购自Proteintech公司；Alexa Fluor 488 Goat anti-Mouse二抗(A11001)、Alexa Fluor 555 Goat anti-Rabbit二抗(A21429)均购自Invitrogen公司。