侯立鹏，马丽芳，王瑞青

(1.西安市第九医院 口腔科，陕西 西安 710054； 2.军事口腔医学国家重点实验室，国家口腔疾病临床医学研究中心，陕西省口腔医学重点实验室，第四军医大学口腔医院 牙体牙髓病科，陕西 西安 710032； 3.第四军医大学 基础医学院，陕西 西安 710032)

骨缺损是骨外科临床上常见的难题，骨再生修复材料始终是骨科研究的热点之一[1]；“支架”“种子细胞”“细胞因子”是骨组织修复材料不可或缺的三要素[2]。种子细胞方面，骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)是研究最多也是最成熟的细胞之一[3]，但其体内、外的成骨能力较低。因此，提高BMMSCs的成骨效率成为国内外研究的热点[4- 5]。

种子细胞的定向分化离不开微环境中的诱导因素，很多证据表明炎症在骨折早期修复中起着重要的作用[6- 7]。一种新的方法是直接调节炎症因子的活性来促进骨质的再生，炎症因子中研究最多的是肿瘤坏死因子α(TNF- α)[8]。有实验证实，大鼠骨折的24 h内存在表达多种炎症因子如TNF- α、白细胞介素(IL)- 6、和IL- 1β的一个短暂的爆发期，一直持续3 d后才开始衰退[9]。据报道，短时间暴露于TNF- α可增强肌源性基质细胞的碱性磷酸酶(ALP)的活性和矿化结节的形成[10]，增加牙根尖乳头细胞的矿化[11]，并促进脂肪干细胞的骨再生[12- 13]。

本实验拟选用不同浓度的TNF- α短期刺激BMMSCs来检测其体内体外促进成骨分化的能力。

1 材料与方法

1.1 材料

MTS细胞增殖检测试剂盒(Solarbio公司)，ALP活性检测试剂盒(Beyotime公司)，二甲基亚砜(DMSO，美国Sigma公司)，蛋白裂解液、蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂(康为世纪生物科技有限公司)，TNF- α(R&D公司)。……