叶长文，罗凯玉，陈 宸，贾 楠，李 栋，李青常，范 黎，贺 琛*

1.中国烟草总公司郑州烟草研究院，郑州高新技术产业开发区枫杨街2号450001 2.河南农业大学烟草学院，郑州市金水区农业路63号 450002

芽胞杆菌属细菌因其具有抗性强、耐高温、生长快以及对营养要求不高等特点，在烟叶发酵和醇化过程中一直以优势菌群存在［1-2］。张鸽等［3-4］、杜佳等［5］采用传统的分离培养鉴别法，分别对雪茄烟叶叶面、茄衣发酵过程中细菌多样性及演替进行了试验，均证实芽胞杆菌属为雪茄烟叶发酵过程中绝对优势细菌群，并在国内外雪茄外包皮中分离鉴定出了枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）、巨大芽胞杆菌（Bacillus megaterium）、蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）、蕈状芽胞杆菌（Bacillus mycoides）和解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefa⁃ciens）等细菌。其中蜡样芽胞杆菌为食源性条件下的致病菌，广泛存在于土壤、水、空气和动植物体中，当蜡样芽胞杆菌量大于1×105CFU/g时，该菌能产生大量腹泻型肠毒素和致呕吐型肠毒素，从而引起人或动物中毒［6-8］。而目前有关雪茄烟叶中蜡样芽胞杆菌的研究尚鲜见报道。因此，有必要建立有效的检测方法对雪茄烟叶蜡样芽胞杆菌进行准确检测。

国内外食品和饲料行业出台了蜡样芽胞杆菌的相关标准检测方法，如ISO 7932∶2004［9］、GB 4789.14—2014［10］和美国FDA官方检测方法［11］等，这些方法均采用甘露醇卵黄多黏菌素琼脂（MYP）培养基对蜡样芽胞杆菌进行初步分离鉴定，然而芽胞杆菌属为雪茄烟叶菌群中的优势菌属，蕈状芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌和巨大芽胞杆菌等同属细菌的形态特征、生理生化特征与蜡样芽胞杆菌相似，其具有极高的DNA同源性［12］。……