刘昌云，李欣羽，田绍锐，王靖，裴悦宏，马小舟,2，樊光进，汪代斌，孙现超

番茄的克隆、表达与抗病毒功能

刘昌云1，李欣羽1，田绍锐1，王靖1，裴悦宏1，马小舟1,2，樊光进1，汪代斌3*，孙现超1*

1西南大学植物保护学院，重庆 400715；2西南大学园艺园林学院南方山地园艺学教育部重点实验室，重庆 400715；3重庆烟草科学研究所，重庆400715

【目的】番茄（）作为重要的蔬菜作物，其生长受到包括害虫、真菌、细菌和病毒等各种生物因素的危害。明确番茄抗性基因的抗病毒功能与机制，为番茄的抗病毒育种与抗病毒药剂的靶向开发提供理论依据。【方法】从茄科植物基因组数据库Solanaceae Genomics Network中获得的全长，并将其分为4段，利用融合聚合酶链式反应（fusion PCR）扩增获得的序列全长；通过生物信息学分析SlN-like的进化关系、蛋白特征、保守结构域、亚细胞定位以及互作关系；通过实时荧光定量PCR分析在番茄根、茎、叶、花和果实中的表达情况及其在烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus，TMV）侵染后的叶片表达量；借助烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus，TRV）介导的基因沉默技术（virus induced gene silencing，VIGS）沉默番茄内源，摩擦接种TMV-GFP于沉默植株，明确对病毒侵染的影响。实时荧光定量PCR分析沉默植株中脱落酸（abscisic acid）、茉莉酸（jasmonic acid）和乙烯（ethylene）激素相关基因的表达量及在外施乙烯利（ethephon，ETH）3、6、12、24 h后的表达情况，最终明确SlN-like调控激素途径响应病毒侵染的机制。【结果】通过分子克隆与融合PCR技术，从番茄品种Micro-Tom中克隆获得全长3 444 bp的，上传至NCBI获得序列号MW792493。通过生物信息学分析发现SlN-like含有TIR、NB-ARC和NACHT结构域，并与马铃薯（）N-like（AAP44394.1）亲缘关系最近。在番茄各组织中均有表达，在茎中的表达量最高，其次是根、花，叶和果实中的表达量最低。……