王海宏 史俞娜 骆佳慧 张瑶琴

（浙江人欣检测研究院股份有限公司 浙江宁波 315000）

粪大肠菌群，又称耐热大肠菌群，是1种能在44.5 ℃高温下仍可生长繁殖并且能发酵乳糖、产酸产气的需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。它主要来源于人畜粪便，地表水中粪大肠菌群的检测有利于了解水体是否被粪便污染。目前粪大肠菌群的检测方法有多管发酵法、快速纸片法、滤膜法、酶底物法、荧光原位杂交（FISH）技术、聚合酶链式反应（PCR）技术等［1-3］。上述方法各有优缺点，基于成本与操作性的考虑，最常用的检测方法为多管发酵法（15 管），其优点为所需仪器比较常见且便宜，实验较容易操作，但该方法的缺点是需要复发酵进行验证，耗时较长。粪大肠菌群中存在乳糖操纵子，乳糖操纵子是参与乳糖分解的一个基因群，所以粪大肠菌群的特性之一是发酵乳糖、产酸产气。一般在乳糖存在时，乳糖操纵子即可被诱导，乳糖被β-半乳糖苷酶催化生成异乳糖，这种异乳糖能被分解，从而产酸产气。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（英文简称“IPTG”）是1种强诱导剂且不能被分解，是β-半乳糖苷酶的活性诱导物质，它的存在使β-半乳糖苷酶持续保持活性，催化分解乳糖。5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷（英文简称“X-gal”），是β-半乳糖苷酶的底物，水解后呈蓝色。本文采用直接培养法，在EC 肉汤培养基中加入X-gal 溶液和IPTG 溶液，IPTG 诱导表达β-半乳糖苷酶，这能使生色底物X-gal 变成蓝色物质，直接在（44.5±0.5）℃培养（24±2）h 就能观察结果，如产气并且发酵管中有蓝色物质生产证实为粪大肠菌群阳性。……