张海鸥，杨鑫蕾，尉建，嵇冶

（长春理工大学 生命科学技术学院，长春 130022）

随着工业的发展，工厂所排放的大量甾体类化合物，对人类和动物的生长发育带来巨大的危害［1-2］：如引发人类不孕不育、生殖疾病、肿瘤及生物变性等严重问题［3］。近年科学家在自然界发现了属于丛毛单胞菌属的睾丸酮丛毛单胞菌（Comamonastestosteroni，CT）ATCC11996，它 是以甾体作为唯一碳源的革兰氏阴性细菌，并以甾体激素作为碳源和能源物质，进行代谢活动。在之前的研究中已报道了CT的基因组序列，并描述和表征了几种甾体代谢酶与甾体结合的反应过程［4］。CT菌分解甾体激素的过程错综复杂，一共有几十种酶先后共同参与了它的代谢过程［5］，SDR短链脱氢酶就是众多代谢酶家族中的一员。

过去研究表明LuxR、LysR、TetR蛋白对睾丸酮丛毛单胞菌（CT菌）中的很多脱氢酶具有调控作用［6-8］，它们可以与短链脱氢酶及甾体激素互相结合并对甾体激素进行降解。因此研究CT菌中SDRx脱氢酶的调控作用具有重要的研究价值。本研究采用基因克隆、重组质粒构建、质粒共转化、ELISA、高效液相等方法，研究这三种蛋白对SDRx的调控作用，从而为更好的利用CT菌修复环境中甾体激素的污染的研究做贡献，可为睾丸酮丛毛单胞菌在自然界中甾体激素的生物降解及基因调控研究提供实验依据［9-12］。

1 实验材料

CT菌，pCR2.1-TOPO自杀质粒由德国基尔大学熊光明教授惠赠。质粒小提试剂盒来自上海Songon公司，DNA凝胶回收试剂盒来自北京TIAN GEN公司，睾丸酮、孕酮、雌酮、17a-乙炔基雌二醇、甲睾酮均来自德国Dr.Ehrenstorfer公司，羊抗鼠抗体来自上海Chemicon公司。……