谢 辉，周 蕾，祁芝珍，邵高祥

鼠疫是由鼠疫菌感染所引起的一种自然疫源性疾病，能通过呼吸道直接接触传播，引起人间疫情暴发流行。快速有效的诊断技术是控制鼠疫疫情的关键，鼠疫菌传统诊断方法主要有细菌培养及鼠疫反向血凝试验，在鼠疫监测和疫源地调查中使用频率高，特异性较强，但操作复杂且耗时，易延误疫情判定。本研究是基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR诊断方法，首先是建立荧光定量PCR(探针)诊断方法以快速准确检测鼠疫菌，其次将荧光定量PCR检测试剂(引物、酶、dNTP)预混冻干，彻底摆脱冷链运输和冷藏保存，从而制备一种能够在室温(25 ℃)稳定保存的试剂，使用时仅需将待测核酸溶液与预混试剂简单混合(试剂可瞬间崩解)即可上机检测，大大简化了操作流程，降低了外源污染的可能性。这种基于室温长期储存的核酸检测预混体系的荧光定量PCR检测方法，适合鼠疫疫源地监测以及流行病学现场调查，为鼠疫的预防和控制提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 试剂及仪器 核酸检测试剂(探针法)由北京磐创精准有限公司提供；中国细菌浊度标准管(批号2020-1)由中国药品生物制品检定所提供；荧光定量 PCR扩增仪购于鲲鹏基因(北京)科技有限责任公司。

1.1.2 实验菌株 测试菌株：55株鼠疫耶尔森菌菌株是分别从11个鼠疫自然疫源地不同宿主动物分离获得的代表株；减毒菌株EV76由鼠疫菌专业实验室提供。对照菌株：假结核耶尔森氏菌15种血清型，由鼠疫菌专业实验室提供。……