王振河，姜德谦，许丹焰△

(1.厦门大学附属第一医院心内科，福建厦门 361003；2.中南大学湘雅二医院心内科，长沙 410011)

环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids，EETs)可促进缺血组织生成新生血管[1]，可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)可导致细胞内EETs被迅速降解[2]。因此，使用sEH抑制剂可抑制EETs迅速降解，有效增加EETs在细胞内浓度和效用[3-4]。内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)表达过氧化物酶增殖体激活受体-γ(peroxisome proliferator activated receptor-γ,PPAR-γ)[5]，且EETs是PPAR-γ内源性激动剂[6]。所以，sEH抑制剂t-AUCB可降低EPCs的EETs降解，增强EPCs的PPAR-γ表达水平及活性，促进EPCs对梗死心肌血管生成作用的影响。本研究通过检测t-AUCB干预的EPCs移植后不同时间点梗死心肌边缘区Ⅷ因子的表达情况，验证t-AUCB对EPCs促进梗死心肌血管生成功能的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

80只清洁级实验雄性小鼠，6周龄，由中南大学湘雅二医院实验动物中心提供。EPCs表面分化抗原购自英国Beckmancoulte公司；免疫组织化学试剂购自美国Sigma-Aldrich公司，分析纯试剂；Ⅷ因子购自英国Beckmancoulte公司。

1.2 方法

1.2.1实验分组

直接注射不同浓度(0、1、10、50、100 μmol/L)t-AUCB的小鼠作为t-AUCB组。PPAR-γ阻断剂GW9662(5 μmol/L)预干预30 min后，再加入100 μmol/L t-AUCB干预的小鼠作为GW9662+t-AUCB组。

1.2.2EPCs的分离、培养

75%乙醇溶液处死小鼠，消毒，无菌条件下去除小鼠胫骨及股骨肌肉及皮毛，1 mL注射器抽取无菌生理盐水，冲出小鼠四肢长骨骨髓，密度梯度离心5 min，吸取中间单个核细胞，按5×105/mL密度转移至包被有大鼠Fibronectin 的细胞培养皿中，加入含5%胎牛血清和生长因子的EBM-2培养基，4 d后全量换液，隔天半量换液，倒置相差显微镜下观察不同时间点细胞形态。

1.2.3EPCs的鉴定

细胞培养7 d后，加入Dil-ac-LDL(10 mg/L)染色，观察细胞摄取Dil-ac-LDL结果；流式细胞仪检测EPCs表面分化抗原CD34、CD133、CD31、Flk-1表达情况。……