王 珍，脱浩亮

（中牧实业股份有限公司兰州生物药厂，兰州 730046）

近年来，随着口蹄疫疫苗生产工艺的技术升级，已从转瓶生产工艺全面转型升级为悬浮培养工艺，但在种毒制备过程中还离不开转瓶培养工艺，而转瓶细胞的培养离不开血清，所以血清在口蹄疫疫苗生产的环节中扮演着至关重要的角色。但是血清的市场价格近几年一直居高不下，而且还呈现出逐年上升的趋势，为降低生产成本，号召国家节能减排的国策。本研究通过改变转瓶细胞培养中血清的加量探讨口蹄疫转瓶培养的最佳血清加量。

1 材 料

1.1 种毒、转瓶细胞及培养基

BHK21转瓶细胞、口蹄疫O型及A型种毒，均由中牧股份兰州生物药厂提供；细胞培养基、1900病毒维持液，由宜兴赛尔生物科技有限公司提供。以上材料均为保质期内正常材料。

1.2 试验动物

2～3日龄、正常生活的昆明系健康乳鼠，体重6～8g，由兰州生物药厂四车间饲养人员提供。

1.3 仪器与设备

15L玻璃细胞瓶、转瓶机、超速离心机（型号为Beckman_L-100XP），均由兰州生物药厂配备。

2 方 法

将生长良好的转瓶细胞充分消化后，平均分成8份，分别加入血清含量为1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%的细胞培养液，按1∶5比例进行分种，置37℃的转瓶机中培养48h，观察细胞生长情况并做详细数据记录。

将培养48h的转瓶细胞消化后，再加入相应血清含量的细胞培养液，按1∶5比例进行分种，置37℃的转瓶机培养48h，观察细胞生长情况并做详细数据记录，使其连续传代5代。

将第5代培养48h不同血清含量的转瓶细胞弃去细胞废液，分别将含有5%口蹄疫O型及A型种毒的1900维持液加入细胞瓶，每瓶500mL，观察细胞病变情况并记录详细数据，待细胞病变达90%后收获[1]。……