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基于TaqMan实时荧光PCR的拟松材线虫分子鉴定技术

2021-10-11宋志强张旭君康李鹏王立超周立峰陈凤毛

中国森林病虫 2021年5期
关键词:效率检测

宋志强,张旭君,康李鹏,王立超,周立峰,陈凤毛

(1.淳安县林业局,浙江淳安 311799;2.南京林业大学林学院,江苏南京 210037)

拟松材线虫Bursaphelenchus mucronatus是松属Pinus植物的寄生性线虫,广泛分布于欧亚大陆[1]。作为松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的姊妹种,两者之间的亲缘关系极为接近,个体形态和生物学特性极为相似,占据着相同的生态位,并拥有相同的媒介昆虫和寄主类群[2];两者能够杂交,产生可育杂交后代,但后代的繁殖能力相对较弱[3-4]。另外,一些拟松材线虫的虫株对松树也具有较强的致病性[5-7]。因此,拟松材线虫是公认的松材线虫病病原鉴定最为主要的干扰物种,如何区分松材线虫和拟松材线虫成为限制松材线虫病病原鉴定准确率的主要因素。

当前,国内外对于松材线虫病病原鉴定大多采用形态学和分子生物学技术。形态学鉴定主要根据雌性成虫的尾尖突长短来区分松材线虫和拟松材线虫[8-9],但由于个体之间存在一定的差异,往往导致没有丰富种类鉴定经验的检验人员难以准确识别[10]。另外,由于取样量和取样季节等因素的影响,从松木样品中分离出来的线虫数量过少或找不到雌性成虫等情况时有发生,妨碍了形态学鉴定。随着生物技术的发展,分子技术已经成为松材线虫物种鉴定的常用辅助手段之一,但由于松材线虫和拟松材线虫的亲缘关系十分接近,假阳性现象偶有发生,错误地将拟松材线虫鉴定为松材线虫。因此,在研究松材线虫分子检测与鉴定技术的同时,开发拟松材线虫分子鉴定技术,构建可疑线虫双重检测的分子鉴定技术体系,对于提高松材线虫种类鉴定准确性具有十分重要的意义,同时也能够为拟松材线虫本身的系统发育等基础生物学研究奠定坚实基础。……

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