孙玉会，刘旭丽

（上党区人民医院，山西 长治 047100）

0 引言

心肌病（CM）是一组由于心脏下部分腔室（即心室）的结构改变和心肌壁功能受损所导致心脏功能进行性障碍的病变。阿霉素（ADR 或DOX）是一种蒽环类抗肿瘤药物，因其对很多肿瘤均有较好的疗效，所以被广泛应用于临床。然而，其具有严重的心脏毒性[1-3]。p38MAPK 作为MAPK 家族中的一个重要成员，主要被环境应激及细胞因子激活，主要参与调节细胞的生长、分化、分裂以及死亡[4-5]。

血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]自1983 年在大鼠脑组织中被发现以来，从被认为是无活性的代谢片段到目前越来越多的生理及病理效应被发现，特别是在心血管系统的作用被许多学者重视[6]。本文应用DOX 损伤H9c2 心肌细胞，为深入阐明Ang-（1-7）的心肌保护作用提供新的实验依据。

1 材料和方法

1.1 材料

血管紧张素-（1-7）、N-acetyl-L-cysteine（NAC）、阿霉素、Hoechst 33258、双氯荧光素（DCFHDA）和罗丹明123（Rh123）购自Sigma Aldrich 公司（USA），细胞计数试剂盒8（CCK-8）由Dojindo Lab（日本）提供，蛋白预览Marker（10-170Kd）购自Fermenta 公司，DMEM-F12 培养基以及特级胎牛血清（FBS）购自Gibco BRL（USA），抗t-p38、p-p38抗体及SB302580（p38MAPK 抑制剂）购自Cell Signaling Technology Inc（CST）。

1.2 细胞培养和分组

H9c2 细胞来源于大鼠胚胎期心脏组织。在37 ℃、5%CO2的条件下，培养于含有10% 胎牛血清的DMEM-F12培养基中。

实验分为8 组：①正常对照组；②阿霉素损伤组；③血管紧张素-（1-7）预处理+阿霉素损伤组：10-3μmol/L Ang-（1-7）作用H9c2 心肌细胞2 h，撤去，用PBS 洗两2 次，接着5 μmol/L DOX 作用24 h；④SB203580 预处理+阿霉素损伤组：5 μmol/L SB203580 作用H9c2 心肌细胞60 min，撤去，用PBS 洗2 次，接着5 μmol/L DOX 作用24 h；⑤NAC 预处理+阿霉素损伤组：1000 μmol/L NAC 作用H9c2 心肌细胞60 min，撤去，用PBS 洗2 次，接着5 μmol/L DOX 作用24 h；⑥血管紧张素-（1-7）处理组：10-3 μmol/L Ang-（1-7）作用H9c2 心肌细胞2 h；⑦SB203580 处理组：5 μmol/L SB203580作用H9c2 心肌细胞60 min；⑧NAC 处理组：1000 μmol/L NAC 作用H9c2 心肌细胞60 min。

1.3 Western blot 测定p38MAPK 蛋白……

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