卢晓明，李晓东

（石药集团 维生药业（石家庄） 有限公司，河北 石家庄 050035）

0 引 言

国内维生素C 的生产采用两步发酵的生产工艺，第1 步是单菌发酵，将D- 山梨醇转化成L-山梨糖；第2 步是混合菌发酵，通过普通产酮基古龙酸菌（Ketogulonicigenium vulgare） （俗称小菌）及其伴生菌巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）（俗称大菌） 的共同作用将L- 山梨糖转化成2- 酮基- L- 古龙酸（2- KGA），其中小菌为产酸菌，其代谢产酸能力决定发酵强度。因此，选育生长快、产酸速率高的速生型小菌是提高生产效率的关键。

普通产酮基古龙酸菌的生长代谢受多种脱氢酶的影响，由于菌株诱变后菌体形态和菌落特征发生改变的几率很小，挑选没有目的性。为了避免漏筛，对诱变后存活单菌落基本上是全部检测，由于菌落直径不足1 mm，常规的筛选方法需将单菌落富集培养后，再通过试管或摇瓶培养，根据每个菌株的生长产酸情况判定取舍，筛选量大，且周期很长。

琼脂平板筛选法和微孔板筛选方法是目前常用的2 种筛选方法。

刘志钰等人通过抑菌圈和微孔板法筛选出高产菌。

刘堂浩等人利用荧光强度变化高通量筛选产酪氨酸酿酒酵母。

目前，尚无普通产酮基古龙酸菌基于酶学特性及产物特点等方面的高通量筛选方法的报道。由于普通产酮基古龙酸菌为好氧菌，生长较慢，对杂菌的抵御能力弱，筛选过程需振荡培养，并保证无菌度，不适于用微孔板或深孔板培养等装置进行筛选。

基于上述原因，为了防止漏筛、提高筛选效率和准确性，本研究对检测手段和培养装置进行更新，通过在固体平板和液体培养基中添加适量混合指示剂，使反应体系在pH=6.0～7.0 颜色变化灵敏；……