蒋欣怡，王书卿，杨怡萱，朱振洪

（浙江中医药大学 生命科学学院，浙江 杭州 310053）

塑料制品具有强度较高、质量较轻、抗腐蚀、价格较便宜等优点，在人们生产生活中得到了广泛应用[1]。塑料的应用在给人们带来极大便利的同时也带来了很大程度上的负面影响。当今，大部分废弃塑料制品只有通过焚烧、使用化学试剂等方法才能快速降解，在自然环境中通过光、生物降解[2]的速度非常缓慢，大概需要几百年的时间才可能降解到完全消失[3]，研究发现有一些菌种可以以塑料为食并在其上生长，菌种产生的酶将其转化为自己生长所需的物质[4-5]且不会破坏[6-7]环境[8]。所以当前利用生物技术处理废弃塑料[9]已经成为了非常值得研究的内容。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂

胰蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、可溶性淀粉、聚乙烯醇（PVA）、聚氯乙烯（PVC）。

1.1.2 主要仪器

PCR扩增仪、台式冷冻离心机、立式压力蒸汽灭菌器、琼脂糖DNA凝胶电泳仪。

1.2 方法

1.2.1 土壤菌种的采样

在杭州市生活垃圾填埋场周边的土壤中采样，挖取地表下约15cm的土壤用塑料袋装好，取回保存备用。

1.2.2 土壤微生物的分离

（1）通过稀释涂布的方法将菌种进行浓度梯度分离，划分成细菌、真菌。（2）观察并标记不同形态、类型的菌落，进行挑菌分离培养。（3）通过分析菌种的长势、形态，观察其中是否含有其他菌种，并再次进行分离，以确保菌种分离的完整性。

1.2.3 菌种的选择性培养

将固定培养基培养的纯化菌种培养在以PVA、PVC为碳源的培养基上，观察是否生长（细菌大概1-2天的生长周期，放线菌和真菌大概3-5天生长周期）。……