陈文芳，桂文龙，颜 卫，孟欣欣，钱逸雪，霍英卓，蒋志伟

（江苏农牧科技职业学院，江苏 泰州 225300）

骨骼透明标本的制作过程受多种因素的影响，近年来对动物骨骼透明标本的制作和应用越来越广泛，制作方法也层出不穷，但对其制作过程的条件探讨很少，本试验通过采用茜素红单染色法探讨不同的室温和不同的碱液浓度对小脊椎动物骨骼透明标本制作效果的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 小脊椎动物 实验所用活体小脊椎动物（蛙类、幼鼠、鱼类）均由江苏农牧科技职业学院实验动物中心提供。

1.1.2 试剂 氢氧化钾、无水乙醇，丙酮（分析纯，浓度为99.7%），丙三醇（分析纯，浓度为99.0%），茜素红，蒸馏水。

1.1.3 器材 解剖器械、烧杯、量筒、胶头滴管、玻璃棒、托盘天平、广口瓶、标本瓶。

1.2 溶液配制 Y1 系列：将无水乙醇和蒸馏水分别按70%、80%、90%、100%的浓度梯度配制。

Y2 系列：将氢氧化钾和蒸馏水分别按1%KOH、2%KOH、3%KOH的浓度配制。

Y3：茜素红0.01 g，KOH 1.0 g，蒸馏水100 mL，混合均匀。

Y4：丙三醇20 mL，KOH 1.0 g，蒸馏水80 mL，混合均匀。

Y5 系列：将丙三醇和蒸馏水分别按50%、75%、100%的浓度梯度配制。

1.3 方法

1.3.1 选材分组 分别在冬、春季和夏季不同室温条件下，选择活体牛蛙（200 g 左右）、出生一周内的幼鼠、15～20 cm 长的鲫鱼和成年观赏金鱼四种小脊椎动物各12只，随机均分成3组，每组4只，按不同的溶液浓度分别操作。

1.3.2 标本预处理 将新鲜完整的活体小动物分别进行预处理。蛙类用金属探针插入活体枕骨大孔，破坏脑脊髓处死，在腹部正中位置切开小口去除内脏，将标本冲洗干净；鱼刮去鳞片，打开腹腔去除内脏，清洗干净；……