贾江涛，赵庆超，杨君娜，曹兴巍，樊庆胜

胃癌是导致人类死亡的重大因素之一， 其发生发展机制十分复杂， 与包括长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA） 在内的多种基因的调控密切相关。 研究显示，lncRNA PlncRNA-1（又名CBR3-AS1）在胃癌组织中表达上调，且与患者总生存率、TNM 分期、肿瘤分级、肿瘤类型等相关临床病理特征显 著相 关［1-2］。 PlncRNA-1 在多种肿瘤包括胆管癌、 视网膜母细胞瘤和前列腺癌等中发挥着重要的致癌作用， 但其在胃癌发生发展中的作用机制并不清楚［3-5］。磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase，PI3K）/蛋 白 激 酶 B（protein kinase B，PKB/AKT） 信号通路调节细胞生长、细胞迁移和细胞代谢等多种生物学事件，还参与调节肿瘤进程［6］。 本研究通过观察 PlncRNA-1 在胃癌SGC-7901 细胞中的表达情况， 并分析其对SGC-7901 细胞增殖、周期和凋亡和PI3K/AKT 通路的影响，探讨其可能的作用机制，以期为胃癌的治疗提供新线索。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 PlncRNA-1-siRNA （上海吉玛），cDNA 第一链合成试剂盒 （上海碧云天），DMEM 培养基、 脂质体 2000、Trizol 试剂、 噻唑蓝 ［3-（4，5-Dimethylthiazol -2 -yl） -2，5 -diphenyltetrazolium bromide，MTT］溶液（北京索莱宝），实时荧光定量PCR（real time fluorescence quantitative PCR，qPCR）试剂盒（杭州主诺生物技术有限公司），总蛋白提取试剂盒、 细胞周期检测试剂盒和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙啶（propidium iodide，PI） 双染细胞凋亡检测试剂盒 （上海贝博生物），PI3K、AKT、磷酸化（phospho，p）-AKT、细胞周期素 D1（CyclinD1）和 B 淋巴细胞瘤-2 基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）抗体（英国 Abcam 公司）。

1.2 细胞分组与转染 采用含10%胎牛血清、100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 链霉素的 DMEM 培养基在5%二氧化碳、湿度饱和、37℃恒温培养箱内常规培养来自中国科学院细胞库的胃癌SGC-7901细胞和正常胃黏膜上皮细胞GES-1。 将对数期的SGC-7901 细胞接种至6 孔板上， 待培养至70% ~80%融合度时，参照脂质体2000 说明书进行瞬时转染。……