张稚兰 邢炳鹏

摘要：为探讨小球藻鉴定的新方法以及评估小球藻属D NA条形码候选序列的鉴定作用，文章对2 0株小球藻的线粒体基因细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（ C O I）、核基因组r D NA的内转录间隔区（ I T S）以及核酮糖1， 5 -二磷酸羧化酶（ r b c L） 3个片段进行P C R扩增测序，并对各序列进行生物信息学分析。研究结果表明： C O I、I T S和r b c L序列在2 0株小球藻中的扩增和测序效率均呈陽性，扩增成功率分别为7 6%、8 3%和7 0%；经评估， C O I、I T S和r b c L序列作为D NA条形码在小球藻分类鉴定中均不适合较低的分类单位，但可参考动植物的分类方法，将多个片段组合应用，从而筛选不同进化级别的D NA条形码。

关键词：小球藻； D NA条形码；分类鉴定；物种；基因

中图分类号： Q 9 4 9.2 1 文献标志码： A 文章编号： 1 0 0 5-9 8 5 7（ 2 0 2 1） 0 2-0 0 6 9-0 8

基金项目：自然资源部第三海洋研究所基本科研业务费专项资金资助项目（海三科2 0 1 5 0 1 2、海三科2 0 1 9 0 1 5）.

A s s e s s m e n t o fC a n d i d a t eD N AS e q u e n c e s f o rB a r c o d i n go f t h eG e n u sC h l o r e l l a

Z HAN GZ h i l a n1， X I N GB i n g p e n g1， 2

（ 1 .T h i r dI n s t i t u t eo fO c e a n o g r a p h y，MN R， X i a m e n3 6 1 0 0 5， C h i n a； 2 .O b s e r v a t i o na n dR e s e a r c hS t a t i o no fC o a s t a lW e t l a n dE c o s y s t e mi nB e i b uG u l f，MN R， B e i h a i 5 3 6 0 1 5， C h i n a）

A b s t r a c t：T o e v a l u a t et h e v a l i d a t i o n o f D NA b a r c o d i n g c a n d i d a t e s e q u e n c ei ni d e n t i f y i n g C h l o r e l l a， t od i s c u s s t h en e ww a y so f i d e n t i f y i n g， t h i sp a p e r t o o k2 0 i n d i v i d u a l s s a m p l e d f o r a n a l y -s i s， 3s e q u e n c e sc y t o c h r o m ec o x i d a s eⅠ（ C O I） ， i n t e r n a l t r a n s c r i b e ds p a c e r（ I T S）a n dr i b u l o s e - 1， 5 - b i s p h o s p h a t eo f c a r b o x y l a s e（ r b c L）w e r ea m p l i f i e da n ds e q u e n c e d . T h e s es e q u e n c e sw e r ea n a -l y z e db yb i o i n f o r m a t i c sm e t h o d s . T h er e s u l ts h o w e db o t ha m p l i f y i n ga n ds e q u e n c i n ge f f e c t so f C O I， I T Sa n dr b c Lt o w a r d st h es a m p l eo fc h l o r e l l aw e r ep o s i t i v e， t h ea m p l i f i c a t i o ns u c c e s sr a t e w a s7 6%， 8 3%a n d7 0%， t h e s e 3s e q u e n c e sw e r en o t s u i t a b l e f o r l o w e r t a x a l e v e l .I n t h e f u t u r e t h e c o m b i n a t i o no fm a n ys e g m e n t s c o u l db e c o n s i d e r e da n d t e s t e d， t op i c ko u t t h ed i f f e r e n t e v o l u t i o n -a r y l e v e l so fD NAb a r c o d i n g .

K e y w o r d s： C h l o r e l l a， D NAb a r c o d i n g， I d e n t i f i c a t i o n， S p e c i e s， G e n e

0 引言

小球藻（ C h l o r e l l a）是球形单细胞真核微藻，隶属绿藻门（ C h l o r o p h y t a） ，是地球上最早出现的生命之一。目前已发现的小球藻有十数种，变种达数百种，生态分布广泛。小球藻生长速度快且光合效率高，既可以光能自养，又可以使用有机碳源异养生长和繁殖，有很高的营养价值，其油脂还可转化为生物柴油，在医药、化工、食品和生物能源等领域有广阔的应用前景[ 1-3]。

关于小球藻的分类，已有的方法侧重于形态结构特征、生理生化特征、超微结构以及细胞壁成分等指标[ 4-5]，这些指标均是小球藻鉴定的重要依据，但易受环境影响。小球藻体积小、变种多且形态特征简单，分属于共……