吴 菁 蒋志勇 李奎生 刘 芳 吕志武 * 黄明沂 肖 瑶

（1 深圳市宝安区福永人民医院消化内科，广东 深圳 518103；2 武汉大学中南医院影像科，湖北 武汉 430071；3 南方医科大学附属深圳宝安医院消化内科，广东 深圳 518101）

食管癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，近年来食管癌的诊断和治疗得到不断发展，但患者预后并不理想，中晚期食管癌患者的5年生存率低于20%[1-2]。食管癌发生、发展过程伴随多种分子及信号通路的协同作用[3]。长链非编码RNA（longchain non-coding RNA，lncRNA）是一种转录长度超过200个核苷酸的内源性RNA分子，通过调控基因表达影响细胞增殖、炎性反应、细胞凋亡、细胞外基质降解等病理过程[4-5]。有研究表明，lncRNA在食管癌、鼻咽癌、淋巴癌等多种肿瘤的发生和进展过程中起重要作用[6-7]。本研究旨在研究AL158206.1在食管癌细胞系中的表达，观察上调AL158206.1对食管癌细胞增殖及迁移的影响，探讨AL158206.1是否通过调控miR-340-5p/ARL4C轴发挥其作用。

1 材料与方法

1.1 细胞与主要试剂 人食管上皮细胞（HET-1A）和食管癌细胞系（Eca109、KYSE30、TE-13、EC9706）购自中国科学院上海细胞库。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）试剂盒购自日本TaKaRa公司。NC质粒和AL158206.1质粒购自北京合生基因科技有限公司。RPMI1640培养基购自美国HyClone公司。胎牛血清购自美国Gibco公司。Transwell小室购自美国康宁公司。Lipofectamine 3000试剂购自美国Sigma公司。MTT试剂盒购自南京诺唯赞生物科技公司。一抗和二抗购自美国Santa Cruz公司。

1.2 细胞培养及转染 食管癌细胞系和食管上皮细胞在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基进行培养，培养条件是37 ℃、5%CO2、饱和湿度。将对数生长期KYSE30细胞接种至6孔板，细胞贴壁生长后，严格按照Lipofectamine 3000试剂说明书进行转染操作，分别转染AL158206.1质粒（AL158206.1组）和NC质粒（NC组），转染12 h后更换培养基培养。……