张庆乾 叶 菁 陈 淼 陈嘉斌 徐国暑 谢鑫灵 余志红

浙江省立同德医院 浙江 杭州 310012

清热消积方基于肿瘤患者“正气虚损、阴阳失衡、脏腑功能失调，痰、瘀、热、毒互结”的病机而组方。已有研究证实该复方具有较好的抗肿瘤效果，但其是否通过调控免疫功能进而发挥抗肿瘤作用尚不清楚。本研究采用荷瘤Lewis肺癌小鼠移植瘤作为研究对象，观察其对肿瘤组织PD-1/PD-L1 蛋白及相关细胞因子的影响，对其抗肿瘤机理进一步探讨。

1 材料与方法

1.1 材料：分述如下。

1.1.1 动物模型：Lewis肺癌细胞株购于中国科学院典型培养物保藏中心（中国科学院上海生命科学院细胞库）。1.1.2 实验用药：清热消积方中药材蛇六谷、白花蛇舌草、半枝莲、绞股蓝等由浙江省立同德医院药房提供。以上药材采用粉碎机进行粉碎，过200 目药筛后于3～5L圆底烧瓶中，加水混匀后置于中药陶瓷罐中加热提取2h，过滤收集全部滤液。残渣重复提取，合并两次滤液，于旋转蒸发仪中减压浓缩。最后将全部中药提取后浓缩提取液，并于冷冻干燥机中低温减压干燥，备用。

1.1.3 主要试剂及仪器：小鼠血清γ 干扰素（IFN-γ）试剂盒、白介素-2（IL-2）试剂盒以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）试剂盒购自南京建成生物工程研究所；DMEM细胞培养基、胎牛血清、双抗、胰蛋白酶消化液均购自兰堡生物技术服务部；小鼠脱毛剂（LANUOR 兰诺儿）购于杭州宏莱生物科技有限公司。

1.2 方法：分述如下。

1.2.1 细胞培养：在25cm2细胞培养瓶中，含10%胎牛血清和1%抗生素的DMEM 培养液培养肺癌细胞株Lewis，置于5% CO2培养箱，待生长至80%融合时用0.25%胰酶-EDTA消化传代。……