张珂，肖瑞霞，修贺明

(河南金泰生物技术股份有限公司，河南 郑州 450000)

叶酸参与体内多种生化反应，对维持染色体稳定起着重要作用[1]。叶酸本身无活性，需要5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)与甲硫氨酸合成酶还原酶(methionine synthase reductase，MTRR)的参与才能发挥活性并维持体内叶酸的正常代谢[2]。MTHFR和MTRR突变后酶活性降低，导致体内同型半胱氨酸水平升高及DNA低甲基化，从而引起多种疾病。叶酸缺乏是新生儿神经缺陷发生的主要病因，育龄妇女适当补充叶酸可有效预防新生儿出生缺陷的发生[3-5]。本研究对河南地区MTHFR和MTRR基因多态性进行分析，为个体化增补叶酸及降低疾病发生率提供遗传学依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象根据知情同意的原则，对河南地区受检人群进行遗传检测，排除DNA抽提不符合要求者，共获取有效样本数量344例，其中男173例，女171例。

1.2 DNA采集与基因分型采集受检者的口腔黏膜上皮细胞，利用柱式抽提试剂盒进行DNA抽提，抽提试剂盒采购于上海生工。采用AGENA公司Mass ARRAY®DNA质谱阵列基因分析系统进行MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G基因多态性的检测。通过ASSAY DESIGN SUITE V2.0进行在线引物设计，引物信息见表1。聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)反应分为3步(多重PCR反应，SAP反应，iPLEX延伸反应)进行，检测试剂盒为Complete iPLEX®Gold Genotyping Reagent Set 10X96。多重PCR反应：95 °C预变性2 min，45个循环(95 °C 30 s，56 °C 30 s，72 °C 1 min)，72 °C延伸5 min。SAP反应：37 °C 40 min，85 °C 5 min，4 °C 2 min。iPLEX反应：94 °C 30 s，40个循环(94 °C 5 s)，5个循环(52 °C 5 s，80° C 5 s)，72 °C 5 min。反应体系见表2。PCR反应结束后，利用分析软件确定各个样本的基因分型结果。

表1 引物序列信息

表2 PCR反应条件

1.3 统计学方法对基因分型频数进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验，采用SPSS 20.0统计软件进行基因频数和等位基因频率的统计分析。……