张燕妮，杨雨涵，辛 阳，李双全，鞠会艳*

（吉林大学植物科学学院·吉林长春·130062）

在微生物相关研究工作中，菌种的保存是十分重要的。每株菌种性质不一样，在利用土壤微生物进行相关研究时，能从土壤中分离出一些有意义的菌种，但接种到平板上的菌株在4℃低温条件下也仅能保存数天，并且多次接种后菌株性质也会发生一些变化，故应当对菌株进行长期保存以便今后更有效地分析菌株的生理生化性质和实践应用意义。本研究探索了几种菌种的保存方法，并比较了这几种方法的优劣[1-3]。

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 土壤样品

2020年从白城市通榆县新华镇永安屯A、B、C和D不同地点采取一定土壤样品。这几个地点位于东经123°1′、北纬44°47′、海拔153.0m、气压995.0hPa。这8个地点的土壤属于pH 8.60的盐碱土。

1.1.2 菌株来源

从采取的盐碱土中分离纯化得到9种菌株。其中4种真菌中Y8和C4-3通过了12%氯化钠的盐筛，Y10、Y11通过了16%氯化钠的盐筛；2种细菌D4-1、X10和3种放线菌X12、ⅠB、Ⅲ18均通过了12%氯化钠的盐筛。

1.1.3 主要培养基和仪器

LB培养基、PDA培养基[2]、6mm正方形滤纸片、冻存管、10%甘油、30%甘油生理盐水（15mL甘油+氯化钠0.45g+蒸馏水至50mL）、1.5mL EP管、移液器、恒温培养箱、4℃冰箱、-20℃冷冻柜、-80℃冷冻冰箱。

1.2 保存方法

1.2.1 PDA生长菌株保存[4,5]

A：滤纸片保存法（-20℃保存）：将所收集的菌种分别接种培养基，用无菌小镊子夹住灭菌滤纸片（9片滤纸片）放入平板中接种的菌周围（详见图1），等待菌丝长至滤纸片上后，可用无菌小镊子将其小心放入冻存管中。每个冻存管放3片，为3个重复，旋紧盖子后做好标注放入-20℃冰箱冷冻保存。……