刘娟 朱春晓 肖雪琼 莫陈汨 王高峰 肖炎农

（华中农业大学植物科学技术学院，武汉 430070）

蛋白与蛋白之间的相互作用是生物体普遍存在的现象，改变蛋白间的相互作用可能调控蛋白的生物学功能，从而影响机体正常生长发育［1］。因此，研究蛋白间互作关系对于揭示生命过程的调控机制至关重要。目前应用于互作蛋白筛选的技术主要有酵母双杂交（yeast two-hybrid，Y2H）、双分子荧光互 补（bimolecular fluorescent complimentary，BiFC）、pull-down 等［2］。

免疫沉淀联合质谱分析技术（immunoprecipitation combined with mass spectrometry，IP-MS）是 指在非变性条件下进行细胞的裂解从而保持了细胞内蛋白间的相互作用关系不被破坏，当目标蛋白被蛋白琼脂糖珠上共价连接的特异性抗体捕获（免疫沉淀）时，可能同时捕获参与蛋白间互作的伴侣蛋白，通过反复洗涤除去非特异性结合的蛋白质后，采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离并通过液相色谱串联质谱分析（liquid chromatographytandem mass spectrometry，LC-MS/MS）进行蛋白种类的鉴定［3］。目前，该技术已广泛应用于研究蛋白间的互作。如Li 等［4］使用该技术鉴定与RBM45 特异性相互作用的蛋白质，并通过免疫印迹和免疫细胞化学验证了选定的PPI，证实RBM45 主要在细胞核中依赖与RNA 的相互作用和许多其他RBP 缔合。Phee等［5］使用免疫沉淀结合蛋白质组学筛选拟南芥中的与植物光敏色素发生直接或间接相互作用的新型潜在互作蛋白，以阐明植物中光信号通路。李耀东等［6］筛选得到与A 型流感病毒M2 结合的多种蛋白，通过质谱分析确定ataxin 10 和3 个真核翻译起始因子为候选互作蛋白。岳金荣等［7］通过制备多克隆抗体进行免疫沉淀，筛选出165 种特有的差异蛋白，通过蛋白质互作网络分析发现，直接与植物盐藻MAPK 相互作用的蛋白有4 种。……