李 敏 黄炳炽 彭家杰 胡健声 洪伟彬 莫钻兰 黄洁莹

广东省东莞市动物疫病预防控制中心，广东东莞523000

锦鲤疱疹病毒病，是由锦鲤疱疹病毒（Koi her⁃pevirus，KHV）所引起的致死率80%～100%的流行性疾病，仅感染锦鲤、鲤及其变种[1-4]。该病被我国列在《一、二、三类动物疫病病种名录》中的二类疫病，世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须申报的疫病[5]。1998年，该病首次由德国和以色列学者发现，中国香港于2001年发生首例，随后在印度尼西亚、日本等东南亚国家相继发生，现已流行于世界各地[6-7]。

水产行标《SC/T 7212.1-2011》作为此次锦鲤疱疹病毒病病原检测能力测试的依据和实验室检测的主要方法，属于传统聚合酶链式反应（PCR），具有灵敏度高、准确率高等优点，但在实际应用中，需要TK、Sph基因PCR、电泳和产物测序，存在检测时间长、操作繁琐且易污染、不能准确定量等问题。荧光定量PCR 检测耗时短、操作简便、能定量等优点被广泛应用于病原体检测[8-10]，越来越多商品化的荧光定量PCR 试剂盒被研发出来。因此，本试验拟通过此次病原检测能力测试的样本来验证不同厂家生产的试剂盒的性能。

1 材料与方法

1.1 材 料

1）样品。样品编号为K34-1、K34-2、K34-3、K34-4，由中国检验检疫科学研究院提供，4 份样品均为鱼内脏组织匀浆上清样品，采用冻存管包装。本次试验使用的阳性标准物质由中国检验检疫科学研究院提供。

2）试剂。海洋动物组织基因组DNA 提取试剂盒（批号：S8107）、PCR MasterMix（批号：KT201-02）购自天根公司；引物（批号：211044344）由生工生物工程（上海）股份有限公司合成；DL1000 DNA Mark⁃er（批号：ATG1607A）购自TaKaRa；50×TAE（批号：690674223）、gelred 核酸染料（批号：BS354B）购自biosharp；……