余思茗 张玥 王婷婷

乳腺癌(Breast Cancer)居全世界女性癌症发病率首位,是危害女性生命和健康的最严重的恶性肿瘤之一［1］。大多数乳腺癌是一种激素依赖性的高度异质性实体瘤,预后较差,利用免疫组化进行分子分型,根据不同分型给予个性化治疗方案对于治疗乳腺癌尤为重要［2］。因此深入探究乳腺癌发生发展的机理,给患者有效的治疗手段,仍是医学研究的重要课题之一。蛋白质翻译后的修饰(post-translational modifications),如磷酸化修饰、泛素化修饰、SUMO 化修饰等,可调控相关致癌因子的降解和活性,因此对于肿瘤的发生、发展至关重要［3］。RNF4 作为一种靶向SUMO 链的泛素连接酶,可通过与多种致癌因子的磷酸化形式结合,增强c-Myc、c-Jun 等致癌因子的稳定性和活性,促进肿瘤生长［4,5］。同时,RNF4 的活性也与多种癌症高度相关。在30%的结肠腺癌患者样本中,RNF4 蛋白水平显著升高,并且高水平的RNF4 mRNA 与乳腺癌患者的低生存率也密切相关［5］。故本研究旨在探讨沉默内源性RNF4 对乳腺癌细胞生长的抑制作用及相关的分子机制,并且利用在体裸小鼠乳腺癌模型印证RNF4 作为治疗乳腺癌的潜在药物靶点的可能性。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 实验细胞和动物 人乳腺癌 MCF-7 细胞株购自北京中国医学科学院基础医学研究所；实验动物来源：成年Nu/Nu 裸鼠,体重18～20 g,雌性,通过本院实验中心外购,并寄养。

1.2 构建RNF4 沉默的稳转细胞株 ①选择靶序列：RNF4 shRNA 干扰序 列：5'-GatccGGAAACTGTTGGA GATGAATTCAAGAGATTCATCTCCAACAGTTTCCTT TTTTg-3',3'-AattcAAAAAAGGAAACTGTTGGAGATG AATCTCTTGAATTCATCTCCAACAGTTTCCg-5'；②包装慢病毒：插入RNF4 shRNA 干扰序列的慢病毒载体LV-3(pGLVH1/GFP+Puro)由上海吉玛基因公司制备。取对数生长期人乳腺癌细胞MCF-7 种于6 孔板中,5×105个/孔,每孔加2 ml 含10%牛血清DMEM培养基,置于37℃、5% CO2培养箱进行培养,待细胞贴壁后进行实验。……