王飘，郑晴，胡婷，张海银，许言午，包怡敏

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路的三七总皂苷调控自噬抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤机制研究

王飘，郑晴，胡婷，张海银，许言午，包怡敏

上海中医药大学基础医学院，上海 201203

探讨三七总皂苷（PNS）能否通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬从而减轻H9c2细胞缺氧/复氧损伤机制。将H9c2细胞分为正常组、缺氧/复氧（A/R）组、A/R＋PNS组、A/R＋PNS＋雷帕霉素（Rapa）组、A/R＋Rapa组、A/R＋羟氯喹（HCQ）组、A/R＋3-甲基腺嘌呤（3-MA）组。通过缺氧6 h、复氧2 h建立H9c2细胞A/R模型。CCK-8法检测细胞存活率，乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒检测细胞损伤，Western blot检测自噬相关蛋白Atg5、p62、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白PI3K、Akt、mTOR的表达，荧光法观察细胞自噬流。与正常组比较，A/R组H9c2细胞存活率明显下降，细胞损伤率明显升高（＜0.05），自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显升高（＜0.05），自噬体和自噬溶酶体数量显著增加，自噬流显著增强（＜0.05）；与A/R组比较，用PNS预处理后，H9c2细胞存活率明显上升，细胞损伤率明显降低（＜0.05），自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显降低（＜0.05），p62蛋白表达明显升高，与自噬抑制剂HCQ、3-MA作用相似，荧光结果显示，PNS对自噬流有明显抑制作用（＜0.05）；PNS预处理后p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显升高（＜0.05）。PNS能有效减轻H9c2细胞A/R损伤，其机制与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路从而抑制自噬流相关。

三七总皂苷；缺氧/复氧损伤；自噬；PI3K/Akt/mTOR信号通路；H9c2细胞

缺血性心脏病发病率逐年上升，迄今已成为发病率及致死率最高的疾病之一[1]。虽通过药物或手术等手段可达到恢复血流灌注的目的[2]，但恢复过程中可引起不可逆的心肌组织损伤，即心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury，MIRI）[3]。目前研究表明，细胞自噬作为内源性调节机制参与到MIRI过程中[4]，抑制过度自噬可减轻MIRI[5]。……