永生化犬骨髓间充质干细胞株的建立

2021-08-10陈奕静戴鹏秀张露文李佳锴张翊华

中国兽医学报 2021年6期

关键词：生长

陈奕静，戴鹏秀，张露文，李佳锴，张翊华

(西北农林科技大学动物医学院，陕西杨陵 712100)

近年来，越来越多的家庭开始重视宠物的健康，虽然现代宠物医疗有了很大的提高，但仍有许多严重的疾病不能通过临床治疗手段解决。干细胞疗法是临床实践中的创新,间充质干细胞(MSCs)位于受损部位，分化为组织特有的细胞，并有助于组织修复[1]。利用骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行临床疾病治疗是具有广阔前景的研究领域[2]。与其他干细胞的不同之处在于，它们不仅可分化为相同的中胚层谱系，如骨骼、软骨和脂肪细胞，而且还可分化为其他外胚层和内胚层谱系[3]，因此，BMSCs是成体干细胞的独特类型。

BMSCs具有多向分化潜能、免疫原性及归巢能力，并且取材较为方便，动物骨髓可再生，因此是组织工程种子细胞的首要选择[4]。但BMSCs在骨髓中含量非常有限，体外培养周期短，如果不能尽快使用成功分离的BMSCs，待其传过多代后，各项性能将会明显下降，无法进行下一步研究和应用[5]。建立永生化细胞株可以使体外培养的细胞无限繁殖并且细胞间不存在差异。自发性永生化几率十分小，可利用基因转染等技术提高永生化的发生率，以此来建立永生化细胞株。因此，本试验将构建好的pLOX-Ttag-iresTK慢病毒载体包装后感染犬cBMSCs，连续培养传至50代，并通过细胞形态观察、细胞计数、RT-qPCR基因表达分析、Western blot以及流式和三系分化鉴定，建立永生化犬骨髓间充质干细胞(cBMSCs)，为临床疾病治疗研究提供材料。