祁永华，吴 迪，张晏航，吴鹏程，张 宁

（1.黑龙江中医药大学 佳木斯学院，黑龙江 佳木斯 154007；2.东北林业大学，黑龙江 哈尔滨 150040）

皮肤光老化主要机制为中波紫外线（UVB）穿透皮肤表皮层，导致皮肤内活性氧（ROS）的过量产生[1]，而ROS 可诱导基质金属蛋白酶（MMPs）活性增加，破坏细胞外基质，导致皱纹等皮肤老化症状的出现[ 7]。

楮实子化学成分主要包括生物碱、氨基酸、多糖等[2]。具有抗衰老、抗氧化等药理作用[3,4]。为了了解楮实子多糖的抗氧化活性，有必要确定合理可行的提取工艺。本研究以正交试验确定多糖的最佳提取工艺后，采用UVB 辐射人皮肤成纤维细胞复制光老化模型，研究楮实子多糖的抗氧化活性，为楮实子多糖在抗皮肤光老化方面提供实验支持。

1 实验部分

1.1 药品与试剂

人皮肤成纤维细胞（ESF-1，北京协和细胞资源中心）；楮实子（批号：191003 购自佳木斯市百盛药材公司，经黑龙江中医药大学陈效忠教授鉴定为桑科植物构树Broussoneria papyrifera（L.）Vent.的干燥成熟果实）；D-无水葡萄糖对照品（批号：110833-201205，中国食品药品检定研究院）；DMEM 培养液、胰蛋白酶、PBS，Gibco 公司；胎牛血清、二甲基亚砜、MTT，Sigma 公司。

1.2 主要仪器

YT-SY96 型酶标仪（上海热电仪器有限公司）；8-5K 型离心机（上海安亭科学仪器厂）；FZ-A 型紫外线辐照计（北京师范大学光电仪器厂）；IX-71-21PH 型Olympus 倒置显微镜（日本Olympus 公司）；MS-500E 型半自动生化分析仪（四川美生公司）。

1.3 楮实子多糖提取工艺

1.3.1 楮实子多糖的提取 楮实子干燥后粉碎，称取50g，加入750mL 蒸馏水，浸泡120min，置于水浴锅中升温至80℃，趁热过滤，滤液浓缩至50mL，待冷却后按照醇沉比1∶4 加入无水乙醇，放置过夜，离心，收集沉淀，用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，即得楮实子粗多糖。……