于昕宇，胡 阳，樊佳鹏，邓小丽，王春仁，常巧呈

黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆 163000

伯氏疏螺旋体隶属于螺旋体目，螺旋体科，疏螺旋体属，病原通常呈单细胞疏松盘绕的左旋螺旋结构，是一类可寄生于哺乳动物各器官组织内的革兰氏阴性菌。其宿主动物主要分两大类：一类为小型的禽类、兽类及啮齿类动物，最为常见的是各种鼠类、兔子以及鸟类，是幼蜱和若蜱的供血宿主和病原储存宿主；另一类为大型的鹿科动物及家畜，常见的有鹿、马、牛、羊、犬等，是成蜱的主要供血宿主。伯氏疏螺旋体引起的疾病为“莱姆病”，该病在世界各地流行，在我国主要分布东北地区，给人类健康和畜牧业造成的经济损失十分巨大。本实验对牡丹江海林市野生鹿血携带伯氏疏螺旋体病原的情况进行分子流行病学调查，报道如下。

1 材料与方法

1.1 样品采集

2019年6月间，从我国牡丹江地区海林市采集20份野生鹿的血液样本，所有样本均为静脉采血，分别收集到含有抗凝剂管中并标记，置-20℃冰箱保存。

1.2 主要试剂

血液DNA提取试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司；DL-2 000 Marker、2×Tamaster Mix均购自宝生物工程（大连）有限公司。

1.3 dNA提取

将采集到的血液，按照血液DNA提取试剂盒说明书提取DNA，并置-20℃冰箱保存，备用。

1.4 伯氏疏螺旋体基因序列的扩增

参考相关文献中的引物序列扩增鹿血液样本中的伯氏疏螺旋体5S-23SrDNA基因片段[1]。扩增目的片段的引物序列为：上游引物 5'-CGACCTTCTTCGCCTTAAAGC-3'和下游引物5'- TAAGCTGACTAATACTAATTACCC -3’。PCR扩增体系（总体积25 µL）：2xTap Master Mix(Dye Plus) 12.5 µL，上下游引物各0.5 µL，模板DNA1µL，dd H2O 10.5µL。……