尹坤，王同燕，宋欢欢，白露露，李胜强，谭菲菲，田克恭,3*

(1. 国家兽用药品工程技术研究中心，河南 洛阳 471003；2. 普莱柯生物工程股份有限公司，河南 洛阳 471003；3. 洛阳普泰生物技术有限公司，河南 洛阳 471003)

杆状病毒表达载体系统(Baculovirus expression vector system, BEVS)是近年来被广泛用于高效表达外源蛋白的载体系统，为重组蛋白单体、多聚体蛋白复合物、病毒样颗粒、膜蛋白以及对哺乳动物细胞有毒的蛋白提供了通用的表达平台，广泛应用于医学、农学和兽医学等各个领域[1]。相对于原核、酵母和CHO等表达系统，BEVS具有一定优势：杆状病毒专一寄生于无脊椎动物，安全性高；可对重组蛋白进行正确折叠和翻译后修饰，获得具有生物活性的蛋白；适应于多基因表达如病毒样颗粒 (virus-like particle) 的复杂设计；适用于大规模无血清培养等[2-6]。在实际生产过程中，贴壁转染获得的P0代重组病毒滴度低，需要进一步病毒扩繁来获得高滴度的重组病毒，但由于重组杆状病毒在传代过程中基因组存在不稳定性，在重组病毒扩繁中会导致目的基因片段的丢失，成为重组杆状病毒产品产业化过程中的限制因素之一[7-8]。将传统贴壁转染方式获得的P0代重组病毒传代放大，使重组病毒滴度与外源蛋白表达均达到最优，此过程需要12～20 d传代周期[9]。

本研究利用ExpiFectamineTMSf Transfection Reagent和ExpiSf9对重组Bacmid进行高密度悬浮转染，可在6～10 d内获得足量、高病毒滴度和高表达量的低代次重组杆状病毒，为利用重组杆状病毒表达外源蛋白的产业化生产提供了一条可行的路径。……