猪德尔塔冠状病毒荧光RT-RAA快速检测方法的建立及初步应用
2021-08-06秦毅斌卢冰霞韦祖樟黄伟坚欧阳康
赵 平,秦毅斌,何 颖,卢冰霞,刘 芳,陈 樱,韦祖樟,黄伟坚,赵 武,欧阳康
(1.广西大学,广西南宁 530005;2.广西壮族自治区兽医研究所,广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁 530001)
猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV),又名猪丁型冠状病毒,属尼多目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒亚科(Coronavirinae)冠状病毒属成员,是一种有囊膜的单股正链RNA 病毒,基因组全长约25.4 kb[1]。PDCoV 引发的猪肠道疾病,在临床症状上与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)及传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起的症状相似,可引起仔猪水样腹泻、呕吐等症状,严重的可导致仔猪死亡,也可引起母猪呕吐、水样腹泻、食欲下降等症状[2-3]。
2012 年Woo 等[4]从我国香港地区猪腹泻样品中首次检测到PDCoV;2013—2014 年,Dong 等[5]从国内部分省市养猪场搜集粪便样本进行PDCoV检测,发现阳性率达14.3%,证实我国内地存在PDCoV;2012—2015 年Song 等[6]在江西省采集的356 份临床样本中,检测发现PDCoV 阳性率高达33.71%。2014 年初,由PDCoV 感染所引起的猪腹泻病在美国俄亥俄州猪场暴发,其致病毒株与我国香港地区发现的PDCoV 基因组序列相似度高达99%[7]。随后美国、加拿大、泰国和韩国等国家也相继从临床样本中检测到PDCoV[8-10]。
针对PDCoV 导致的肠道性疾病,目前尚无预防疫苗和特效治疗药物。因此,建立特异性的检测方法进行准确、快速诊断,完善监测体系,对PDCoV 感染的防控具有重要意义[11]。
目前用于检测PDCoV 的RT-PCR、免疫组织化学分析和间接ELISA 等方法均已建立,但这些方法操作繁琐,耗时长,工作量较大,容易造成污染。本研究建立的荧光RT-RAA 方法具有敏感、特异、耗时短、操作简便等优点,适合临床快速检测。……
