安 宁， 许 涛， 周 贤， 张晓霞， 杨 涛， 许美霞△

1华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉与危重病研究所，武汉 430022 2华中科技大学同济医学院附属普爱医院重症医学科，武汉 430034

血管内皮细胞损伤是介导脓毒症(sepsis)导致的血管麻痹、凝血激活和循环衰竭的核心环节。减轻血管内皮细胞损伤对于防治脓毒性休克和循环衰竭具有重要的临床意义[1-3]。Kv1.5蛋白是一类电压依赖性氧敏感钾离子通道，参与细胞的增殖、凋亡及炎症等病理过程。近期研究发现，Kv1.5蛋白在内皮细胞中表达，并参与内皮细胞功能的调节[4-5]。我们前期研究证实，Kv1.5蛋白与血管内皮细胞损伤密切相关，在脓毒症动物模型中，Kv1.5蛋白在大鼠血管内皮细胞中表达明显增加。本研究通过建立脓毒症动物模型，并给予Kv1.5通道特异性阻滞剂DPO-1(diphenyl phosphine oxide-1)干预，观察内皮细胞损伤情况，并检测内皮细胞PI3K、p-Akt蛋白及基因的表达，以探讨Kv1.5是否通过PI3K/Akt信号通路介导脓毒症相关内皮细胞损伤。

1 材料与方法

1.1 实验动物与试剂

成年清洁级SD雄性大鼠60只，体质量(200±20)g，购自华中科技大学同济医学院实验动物中心。LPS及DPO-1购于美国Sigma公司；硫酸肝素(heparin sulfate，HS)、多配体蛋白聚糖1抗体(syndecan-1，SDC-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)试剂盒、兔抗PI3K、p-Akt均购于武汉三鹰生物技术有限公司，引物由武汉巴菲尔生物技术服务有限公司合成。

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型制备与分组 SD大鼠在实验前12 h开始禁食，实验前4 h禁水。将这些大鼠随机分为5组，每组12只。Control组：尾静脉注射0.9%NaCl溶液；LPS组：尾静脉注射LPS 5 mg/kg(以等渗NaCl溶液稀释至1 mL)制造大鼠脓毒症模型；……