付佩彩， 叶 盛， 李志军， 骆 翔， 喻志源

华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科，武汉 430030

少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)为神经胶质前体细胞，约占成年人中枢神经系统(CNS)中所有胶质细胞的5%～8%。OPCs持续存在于成年人CNS中，其形态为双极、三级或多级，是处于早期分化的未成熟细胞。少突胶质细胞(OLs)分布于灰质及白质内，是CNS的成髓鞘细胞。缺血缺氧等导致的CNS脱髓鞘损伤后，OPCs可活化增殖，迁移至损伤处，分化形成OLs，进而形成髓鞘，完成髓鞘再生过程[1]。CNS中钠-钾-氯共转运体1(NKCC1)主要表达在内皮细胞、神经胶质细胞和神经元中，主要调节神经元、神经胶质细胞、内皮细胞、脉络丛上皮细胞中Na+-K+-2Cl-离子进出细胞，在维持细胞的离子平衡，细胞体积、细胞凋亡以及细胞分泌等方面具有重要作用[2]。布美他尼(Bumetanide)为NKCC1特异性抑制剂，既往研究显示布美他尼可促进CNS白质损伤修复，但其具体机制尚不明确。该研究探讨NKCC1抑制剂布美他尼对大鼠脊髓原代OPCs增殖的影响及可能机制，以进一步了解NKCC1对脊髓损伤的影响及其机制。

1 实验材料与方法

1.1 实验动物与试剂

实验用SD大鼠乳鼠购自华中科技大学同济医学院实验动物中心。胎牛血清、DMEM高糖培养液、N2添加剂(100×)、胰蛋白酶、B27添加剂(50×)、DMEM/F12购自美国Gibco公司；T3购自Invitrogen公司；多聚赖氨酸(Polylysine，PLL)、DAPI、布美他尼试剂购自美国Sigma公司；大鼠睫状神经营养因子(Rat CNTF)、重组大鼠碱性成纤维细胞生长因子(Rat FGF Basic)、重组人血小板衍生生长因子-AA(Human PDGF-AA)购自Pepro Tech公司。兔抗NG2、兔抗髓鞘碱性蛋白抗体(MBP)购自美国Neuromarker公司；鼠抗A2B5、兔抗NKCC1购自美国Millipore公司；……