不同剂量双表达蛋白VP2-IL-18免疫原性的比较

2021-08-05王新华孔胶胶付嘉宁

西南农业学报 2021年5期

关键词：剂量

孔娜,王新华,孔胶胶,付嘉宁

(1.菏泽学院药学院，山东菏泽 274015;2.菏泽医学专科学校，山东菏泽 274000)

【研究意义】传染性法氏囊病(IBD)传统疫苗存在免疫失败等多种问题，VP2是传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要结构蛋白和保护性抗原[1]，可采用多种表达系统表达出具有一定免疫原性的VP2蛋白[1-2]，但需要通过合适的佐剂提高免疫效果。【前人研究进展】mIL-18是一种新发现的细胞免疫调节因子[3]，能诱导生成IFN-γ，还可以激活能清理病毒的CD8+T细胞[4]和发挥协调机体体液免疫和细胞免疫功能的CD4+T细胞[5-6]。孔娜[7]将双表达蛋白VP2-IL-18免疫雏鸡，能促进CD4+T、CD8+T细胞的增殖和抗体水平的增加，还可以产生90 %保护率。研究表明IL-18对机体的免疫反应除了有增强作用，还有减弱作用，这主要取决于其剂量[8-9]。【本研究切入点】因此本试验采用不同剂量双表达蛋白VP2-IL-18免疫鸡，并对他们的免疫原性进行了比较。【拟解决的关键问题】摸索VP2-IL-18的最佳免疫增强剂量，为研制新型高效的IBD基因工程疫苗提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1日龄SPF鸡购自山东济南赛斯有限公司；FITC标记的鼠抗鸡CD4单抗和R-PE标记的鼠抗鸡CD8а单抗购自北京博蕾德生物科技有限公司；IBDV ELISA抗体检测试剂盒购自IDEX公司；vvIBDV-GX8/99株为山东农业大学朱瑞良教授从广西收集的IBDV强毒株，毒价为105.5LD50/0.2 mL。

1.2 双表达蛋白VP2-IL-18的制备

将鸡IL-18成熟蛋白基因(mChIL-18) 先插入进双表达载体pFastBacTMdual的PPH下游，构建重组质粒pFastBacTMdual-IL-18，再将IBDV VP2基因插入pFastBacTMdual-IL-18的 PP10下游，构建重组质粒pFastBacTMdual-VP2-IL-18。然后利用Bac-to-Bac系统表达双表达蛋白VP2-IL-18[6]，并制备成油乳制剂。