蒋励，许耀，王世龙，汤超亮，陈文钧

复旦大学附属华山医院骨科，上海 200040

骨折是骨科及手足外科等创伤修复科室常见疾病，多由于损伤部位多样、成因复杂及累计人群广泛等原因给患者和家庭带来经济负担和身心障碍。尽管骨的愈合能力较强，但仍有10%的骨折愈合会受到神经营养和感染等因素引起的骨坏死、骨缺损、骨髓炎等并发症的影响[1]。因而探索成骨调节机制及骨组织形成的生理过程可为临床骨折的治疗提供新的靶点及策略。

成骨分化涉及生长因子、信号通路及调控基因等多种因素，多种信号通路的共同影响可介导和调控骨髓间充质干细胞的分化[2]。随着基因测序技术的研究开展，有研究发现长链非编码RNA H19(long non coding RNA H19，LncRNA-H19)可参与成骨组织的细胞增殖、分化和调节活性的过程，亦有文献提示萎缩性骨不连组织的miR-654-5p的表达与正常骨痂组织显著上调，提示与成骨分化具有密切联系[3-4]。本研究通过观察LncRNA-H19靶向miR-654-5p对人骨髓间充质干细胞成骨分化的促进效应，以探讨其在成骨分化中的分子生物学机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取20只SPF级5～6周龄近交系BALB/c小鼠，雌雄各半，体质量18～25 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，生产许可：SCXK(京)2016-0011。适应性喂养1周，光暗周期12 h，室温20℃～24℃，湿度45%～50%，自由摄食及饮水。

1.2 实验方法

1.2.1 骨髓间充质干细胞分离及培养 (1)分离：小鼠颈椎脱臼处死，手术剪分离小鼠皮肤和肌肉，暴露胫骨和股骨并取下置于含磷酸盐缓冲液(PBS)的培养皿中冲洗3次；另取培养皿加入青链霉素双抗(1%)及FBS(10%)DMEM培养基，无菌剪剪断小鼠胫骨和股骨暴露骨髓腔，1 mL无菌注射器吸取培养皿反复冲洗，直至流出液体为清亮、发白的骨颜色；……