唐志铭，丁继存，翟晓翔，荆梦晴，王蒙蒙，陆 鹭

瘢痕疙瘩是因皮肤遭受创伤和刺激后真皮网状层出现慢性炎症[1]，从而导致成纤维细胞大量增殖和以胶原为主的细胞外基质过度沉积所致。其确切发生机制尚未阐明，也无理想的治疗方法[2]。本课题组应用五倍子瘢痕膏治疗瘢痕疙瘩临床疗效确切[3]，且前期实验研究证实其能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖[4]，但具体作用机制尚不清楚。有研究者应用基因芯片技术证明miRNA在病理性瘢痕与正常皮肤组织中存在差异性表达[5,6]，其中miR-21在增生性瘢痕组织中表达显著高于正常皮肤组织[7]。有研究表明miR-21可靶向抑制10号染色体张力缺失蛋白磷酸酶（phospatase and tensin homologdeleted on chromasom ten，PTEN）表达[8]，而PTEN是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的负反馈调控因子。mTOR信号通路与细胞异常增殖密切相关，在瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖过程中具有重要作用[9]。五倍子瘢痕膏抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖是否与其通过miR-21靶向调控mTOR通路有关？本课题组对此进行了研究探索。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 兔抗人磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、PTEN、p-mTOR单克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司）、辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG二抗（Jackson免疫研究公司）、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒（上海索莱宝生物科技有限公司）、双萤光素酶报告基因检测试剂盒（Promega公司）、miR-21 mimic、miR-21 inhibitor（ 广州锐博生物科技有限公司）、反转录试剂 盒 superscript III 、Lipofectamine 2000 转 染 试剂、pmirGLO质粒载体（美国Invitrogen公司）。

1.1.2 主要仪器 聚合酶链反应（PCR）仪（加拿大Funglyn Biotech公司）、电泳仪（北京六……