朱春月 孙志宾 马爱军 刘志峰 杨敬昆 赵亭亭

大菱鲆()热休克蛋白Hsp47相互作用蛋白His-pull down和质谱鉴定*

朱春月1, 2, 3孙志宾2, 3①马爱军2, 3①刘志峰2, 3杨敬昆2, 3赵亭亭1, 2, 3

(1. 上海海洋大学水产与生命学院 上海 201306; 2. 中国水产科学研究院黄海水产研究所 农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室 山东省海洋渔业生物技术与遗传育种重点实验室 青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室 青岛 266071; 3. 青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室 青岛 266237)

首次克隆了大菱鲆()热休克蛋白基因。该基因cDNA序列全长为1 927 bp, 其中开放阅读框长度为1 218 bp, 编码一条长度为405个氨基酸的多肽链。结果表明, 大菱鲆基因在肝脏、皮肤、鳃和肠等4个组织中都有表达, 表达量最高的组织是肝脏, 表达量最低组织是鳃; 25 °C处理6 h后Hsp47在皮肤中的表达量增加150多倍。利用大肠杆菌原核表达系统表达了Hsp47的his标签融合蛋白, 然后利用His-pull down技术捕获了Hsp47的相互作用蛋白质, 通过质谱分析鉴定出31种候选蛋白, 其中大部分蛋白为参与翻译后修饰, 蛋白转换及分子伴侣; 此外还包括参与脂转运与代谢、能量产生与转换、细胞骨架、防御机制等过程的蛋白质。从31种候选蛋白中进一步筛选出3种分值较高的蛋白: 未知蛋白(uncharacterized protein, A0A6A4TFV0)、胎球蛋白B (Fetuin B, A0A2U9C388)和胶原结合蛋白(collagen-binding protein, A0A2U9B608), 可为后续的研究提供方向。

大菱鲆();Hsp47; 蛋白相互作用; His-pull down

热休克蛋白(heat shock protein, Hsp)是有机体受到高温胁迫后大量合成的一类蛋白, 普遍存在于各类生物中(Feder, 1999)。热休克蛋白主要功能是分子伴侣, 具有多种功能, 能够辅助新合成肽链正确折叠、消除变性或者错误折叠的肽链, 避免应激状态下蛋白质的变性, 减少因疏水基团暴露而导致的蛋白质聚集等(田倪妮, 2014)。……