乌吉斯古楞 张彤

胰腺癌是一种常见的侵袭性恶性肿瘤，是导致癌症相关死亡的主要原因之一[1]。在过去的几十年中，胰腺癌的临床结局并没有显著改善，平均存活率是5%[2]。吉西他滨是最常用的抗胰腺癌药物之一，然而目前的抗胰腺癌疗法仍不令人满意。研究表明，B7-H3基因的沉默联合吉西他滨能够抑制人胰腺癌细胞株Patu8988t生长[3]。分泌磷蛋白1(secreted phosphoprotein-1，SPP1)具有促进肝癌细胞生长的作用，下调SPP1导致肝癌细胞增殖受到抑制，细胞凋亡产生抗性[4]。SPP1在宫颈癌组织和细胞系中过表达，SPP1的下调可抑制HeLa细胞的增殖，诱导细胞凋亡并增加顺铂的化学敏感性[5]。然而沉默SPP1联合吉西他滨在胰腺癌细胞增殖、细胞周期、凋亡中的作用目前仍未可知。基于此，本研究利用小干扰RNA技术沉默SPP1表达，探讨沉默SPP1联合吉西他滨对胰腺癌细胞增殖、细胞周期、凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1 细胞与试剂 胰腺癌PaTu 8988t细胞购自美国典型培养物保藏中心(American type culture collection，ATCC)，Roswell Park Memorial Institute(RPMI)-1640培养基购自美国Gibco公司，吉西他滨购自美国礼来公司，si-con、si-SPP1购自上海吉玛制药技术有限公司，Lipofectamin 2000 转染试剂购自美国Invitrogen公司，细胞计数试剂盒8(cell counting Kit-8，CCK-8)购自日本Dojindo公司，抗SPP1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3，c-Caspase-3)、P糖蛋白(P-glucoprotein，Pgp)、MDR1、β肌动蛋白(β-actin)抗体、辣根过氧化物酶偶联的二抗购自英国Abcam公司，碘化丙啶(propidium iodide，PI)购自美国Sigma-Aldrich公司，FITC Annexin V凋亡检测试剂盒购自美国BD公司。

1.2 细胞培养 胰腺癌PaTu 8988t细胞在RPMI-1640培养基中，其中包含10%胎牛血清、1.5 mmol/L左旋谷氨酸、100 U/ml青霉素、0.1 mg/ml链霉素，置于37℃、5% CO2培养箱中生长。

1.3 细胞转染与分组 收……