刘 群，王 菁，刘桐山，王 钢，韩进刚，冯守明

(1.天津市动物疫病预防控制中心，天津 300402；2.天津市水产研究所，天津 300221)

4.寄生虫检测和细菌分离结果

经制片和显微观察，所检锦鲤病鱼组织均未观察到寄生虫。将病鱼脑、肝胰脏、脾、肾组织病料接种于LB平板上，28℃培养24小时，未见细菌生长。

5.分子生物学检测结果

采用相关检测方法对2018年7月末采集的患病锦鲤鳃组织样品进行SVCV、KHV、CyHV-II、CEV分子生物学检测，结果显示，发病锦鲤鳃组织样品均未扩增出SVCV、KHV、CyHV-II特异性片段(未列出)；CEV TaqMan荧光定量检测方法结果如图4A，显示该样品Ct值小于35，CEV为阳性。

6.人工感染试验结果

养殖水温为(25±2)℃时，由患病锦鲤鳃组织制备组织悬液腹腔注射感染健康锦鲤，并依据《鲤浮肿病诊断规程》(SC/T 7229－2019)中的检测方法对注射组、对照组锦鲤鳃组织进行CEV TaqMan荧光定量PCR检测，结果如图4B所示。人工感染试验结果显示，注射组死亡锦鲤未呈现CEV典型症状，统计锦鲤累积死亡率，其累积死亡率为(65±7.07)%，半数致死时间(LT50)为16天；对照组累积死亡率为(15±7.07)%(图5)。CEV Taq-Man荧光定量PCR检测结果显示，注射组20尾锦鲤中有14尾为CEV阳性，其阳性检出率为70%，对照组未检出CEV。

图4 锦鲤鳃组织样品CEV TaqMan荧光定量PCR扩增曲线

图5 人工感染试验中累积死亡率与注射时间关系

三、讨论

本研究根据天津市北辰区某锦鲤养殖场患病锦鲤流行病学调查及病理学、寄生虫学、细菌学、病毒学鉴定结果，确定2018年夏季引起该养殖场锦鲤暴发性死亡的原因为锦鲤睡眠病(KSD)，其病原为鲤浮肿病毒(CEV)。

从临床症状上看，病鱼常聚集于水面或池塘边缘，或静置于池中倒向一侧，呈昏睡状态。……