郭俊宏，申晓丽，洪向前，马大卉，谢洪彬，杨明民，汪建涛

(深圳市眼科医院青光眼科，暨南大学附属深圳眼科医院，深圳眼科学重点实验室，广东 深圳 518040)

青光眼是世界上第2位致盲性眼病。研究[1]表明：在2040年全球青光眼患者将达到1.118亿人。开角型青光眼(open angle glaucoma，OAG)作为一种主要的青光眼类型，有部分学者[2]认为其主要发病机制是：小梁网细胞(trabecular meshwork cell，TMC)的细胞外基质(extracellular matrix，ECM)异常沉积，使得房水流出阻力增加，最终引起眼压升高。而TMC在氧化应激的作用下会发生ECM的异常沉积[3]。沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator 1，SIRT1)是一种可以使组蛋白中赖氨酸残基去乙酰化的去乙酰化酶，其广泛参与氧化应激耐受、胰岛素分泌和葡萄糖合成等生理活动。此外，SIRT1还能通过抑制ECM的异常沉积影响纤维化进程，在心肌纤维化[4]、肝纤维化[5]等疾病中起到非常重要的作用。笔者前期研究发现，H2O2处理HTMC后，SIRT1的RNA及蛋白表达水平会显著下降。本研究通过在人小梁网细胞(human trabecular meshwork cell line，HTMC)中过表达SIRT1，探讨SIRT1对氧化应激下HTMC功能的影响，为SIRT1用于青光眼的治疗提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

人原代小梁网细胞系购自美国Sc ienCel l公司；细胞培养基购自美国GIBCO公司；SIRT1过表达慢病毒购自上海吉凯基因化学技术有限公司；TRIzol RNA提取剂购自美国Invitrogen公司；第一链cDNA合成试剂盒购自瑞士Roche公司；FastStart Universal SYBR Green Master(ROX)购自美国Thermo公司；30%过氧化氢购自天津市风船化学试剂科技有限公司；Cell Counting Kit-8试剂盒购自日本同仁化工；Transwell细胞侵袭迁移培养皿购自美国Corning公司；ROS活性氧检测试剂盒(DCFHDA法)购自上海贝博生物公司；常温超速离心机购自德国Eppendorf公司；……