黄新亮，余方流，伍云云，王凤各，董博翰

(皖南医学院基础医学院，安徽 芜湖 241002)

据WHO报道[1]，全球约有2.57亿慢性乙型肝炎病毒感染者，目前对乙型肝炎病毒(HBV)感染的免疫防御机制尤其是细胞免疫应答的机制尚未阐明，且HBV慢性感染过程中病理性免疫耐受的确切机制也未明。虽然记忆T细胞(memory T cell，Tm)比非记忆性T淋巴细胞的免疫功能更强大且寿命更长、由效应T细胞或初始T细胞分化而来，但Tm的形成、维持、再应答等确切的分子机制尚不清楚。

目前已知树突状细胞(dendritic cell，DC)是递呈抗原功能最强的细胞且DC负载抗原的技术成熟；已知记忆性T淋巴细胞表达细胞膜分子CD45RO和某些黏附分子。Tm依据TCR分类则种类繁多，而能够结合乙肝病毒表面抗原(Hepatitis B surface antigen ，HBsAg)的特异性Tm就是其中一种。

机体抗乙型肝炎病毒感染免疫过程中特异性Tm是如何形成的？增殖活性如何？本研究基于DC负载抗原的制备技术和Tm的标志分子，进一步用体外用乙肝病毒表面抗原(Hepatitis B surface antigen ，HBsAg)冲击的DC，与自身淋巴细胞反应，探索体外HBsAg特异性CD45RO+CD4+Tm是否形成及增殖活性如何。

1 对象与方法

1.1 对象 选择健康志愿者，纳入标准：年龄均为20岁，健康体检指标为乙型肝炎病毒(-)且无乙型肝炎发病史。

1.2 主要试剂 HBsAg、细胞培养基、MTT(SIG-MA公司)，荧光素标记抗人CD4单克隆抗体、抗人CD45RO单克隆抗体、抗人CD80、CD40及HLA-DR单克隆抗体、IL-2、TNF-α、IL-4和GM-CSF(Biolegend公司)。

1.3 方法

1.3.1 HBsAg冲击DC DC制备参看文献[2]：分离人外周血单个核细胞，用RPMI 1640完全培养液调整人外周血单个核细胞数为2×106/ml。加入4孔细胞培养板。在37℃、5%CO2培养箱中温育2 h后吸弃培养上清和洗涤去除非贴壁细胞，即获得贴壁的细胞。……