杨一秋，李兰，解继胜

(1. 右江民族医学院研究生学院，广西 百色 533000；2. 右江民族医学院基础医学院组织胚胎学教研室，广西 百色 533000)

骨质疏松症是一种以骨量减少，骨骼微结构退化、脆性增加的疾病。绝经期妇女由于卵巢功能减退、雌激素水平的下降加速了骨质的流失，增加了骨折的风险[1]又称为绝经后骨质疏松症(postmenopasal osteoporosis，PMOP)。发生PMOP时破骨细胞功能活跃，又被称为高转换型骨质疏松症[2]。骨稳态取决于破骨细胞对骨骼的吸收和成骨细胞对骨骼的形成作用，这种紧密耦合过程的不平衡会导致骨质疏松症、炎性关节炎等疾病[3]。骨质疏松性骨折危害巨大，但是目前椎体成形术这种手术方式，因其创伤小，并发症低等优势对于治疗骨质疏松症致脆性骨折有一定疗效[4]。因此，调节破骨细胞和成骨细胞之间的平衡对于骨细胞生物学至关重要[5]。多项研究[6-9]主要聚焦于各种药物、蛋白等对破骨细胞的影响以及其具体机制的探究，其中关于RAW264.7细胞向破骨细胞分化的具体方法各有不同。因此，本实验的主要目的是为了探索RAW264.7细胞向破骨细胞分化的最佳条件，为后续的实验研究提供一个可靠的破骨细胞建模方法。

1 材料与方法

1.1 材料 DMEM高糖培养基(Gibco，货号C11995580BT)、FBS胎牛血清(Gibco，货号10099141C)、青链霉素双抗(Gibco，货号15140122)、胰蛋白酶-EDTA，0.25%，含酚红(Gibco，货号25200-056)、巴氏吸管、Recombinant Mouse M-CSF Protein(RD，货号416-ML-050/CF)、Recombinant MouseTRANCE/RANKL(RD，货号462-TEC-010/CF)、RAW264.7细胞(购自中科院上海细胞库)、抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP染色试剂盒(CTCC，货号JD005)、RNA提取试剂盒(AXYGEN，货号AP-MN-MS-RNA-50G AxyPrep总RNA小量制备试剂盒)、实时荧光定量PCR试剂盒(Hieff TM qPCR SYBR Green Master Mix No Rox，货号11201ES08)、倒置显微镜。……