农进，梁琼，廖林，李军，韦凌云，陆江玉，陈红，廖品琥

(1. 右江民族医学院附属医院，广西 百色 533000；2. 广西大学医学院，广西 南宁 530004；3. 右江民族医学院重症医学教研室，广西 百色 533000)

急性呼吸窘迫综合征(acute respiratorty distress syndrome，ARDS)是ICU病房中常见的一种严重综合征，随着俯卧位通气、体外膜肺氧合(ECMO)等高精技术的临床使用，其死亡率有所降低，但仍高达40%左右[1]。有研究显示过度的炎症反应失控是ARDS肺损伤的主要原因，然而使用炎症因子拮抗剂并不能有效降低病死率[2]。自噬性细胞死亡(autopohagic cell death，ACD)是近年来新发现的细胞死亡形式，有望成为ARDS新的治疗靶点。

高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein，HMGB1)是一种重要的细胞外晚期炎症介质，在细菌感染、败血症及其它刺激诱导的ARDS体内外模型中，HMGB1可在细胞内、核内或细胞外水平调节自噬。HMGB1与自噬相互作用在不同细胞类型中有着不一样的机制，且依赖触发损伤的性质[3]。内毒素是感染的重要原因之一，其主要成分为脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)，本实验使用LPS刺激A549细胞，探讨HMGB1对肺泡上皮细胞的自噬是否具有调控作用，为制定新的治疗策略打下基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器 A549 细胞购于中国科学院干细胞库；LC3a/b、HMGB1、β-actin购于Affinity；CCK-8试剂购于Fluorescence；转染试剂LP-2000购于invitrogen公司；凋亡检测试剂盒购于Solarbio；电镜固定液：索莱宝；无水乙醇、丙酮购于国药集团化学试剂有限公司；812包埋剂购于SPI；凋亡检测试剂盒购于Solarbio公司。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞的复苏、传代 从-80℃冰箱中快速取出细胞冻存管，立即放入37℃温水中融解；A549细胞复苏后常规培养、换液，当细胞生长至覆盖培养瓶约80%面积时，对细胞消化、传代后用于后续培养。……