木耶赛尔·伊斯马依力 郭伟鹏 徐保红 乔艳辉

（乌鲁木齐市血液中心 血液研究室，新疆 乌鲁木齐 830000）

本研究利用EB 病毒转化技术，分别用环抱霉素A 转化法、外周血淋巴细胞冻存转化法、微量全血转化法、微量全血冻存转化法将部分RhD 阳性（D 变异型)献血员外周血B 淋巴细胞成功转化成永生细胞系。

1 研究对象，材料,方法，仪器设备

1.1 研究对象

本研究在知情同意原则下，在乌鲁木齐市血液中心无菌采集30 例RhD 阳性（变异型）无偿献血者血液样本，采用肝素抗凝。采集的血液样本，在运输过程中应保持常温，不要冷冻。采集的血液样本的运输尽可能地快捷，一般应在采集后24～48 小时内到达实验室。采集的血液样本在运输中应尽可能不要震荡，以避免溶血。

1.2 材料

R PM I-1640 (Biosharp 北京),淋巴细胞分离液购自天津市灏洋生物制品科技有限责任公司，环孢霉素A (Cyclosporine A，CyA )购自北京索菜宝科技有限公司、胎牛血清(天津市灏洋生物制品科技有限责任公司)、三B95-8 狨猴EBV 转化的白细胞ZQ0164 购自上海中乔新丹生物科技有限公司、二甲基亚砜DMSO(德国Biofroxx)。

1.3 耗材

离心管、培养瓶、培养板、移液管、滤器、滤膜、试剂瓶、二氧化碳、液氮等。

1.4 仪器设备

超净工作台、CO2培养箱、倒置相差显微镜、高压蒸汽灭菌器、电热干燥烘箱、程序降温盒、- 80℃超低温冰箱、电动移液器、水平式离心机、超纯水仪、电子天平、恒温水浴箱、普通冰箱、超低温冰箱、液氮保存罐和转运罐。

1.5 方法

1.5.1 细胞的冻存和复苏

冻存液:90%的胎牛血清加10%的二甲基亚砜，混匀，经0.2μm 抽滤，避光保存（在4℃或-200℃）。……